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羥脂酰輔酶A脫氫酶 ELISA 試劑盒

定性測定
　　　定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性",、"陰性"表示,。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中,，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),，呈陽性反應(yīng)的高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義,。

在間接法和夾心法ELISA中,，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,，陰性孔呈色深于陽性孔,。

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競爭法

競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體,。以測定抗原為例,，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比,。操作步驟如下：

⑴將特異抗體與固相載體連接,，形成固相抗體。洗滌,。

⑵待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原,，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合,。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會與固相抗體結(jié)合,，競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會,，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,，保溫后,，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)充分的量。洗滌,。

⑶加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原多,，故顏色深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量,。待測管顏色越淡,，表示標(biāo)本中抗原含量越多。一般情況,，是通過方波伏安法,，檢測培養(yǎng)體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關(guān)系來終確定體系的終檢測目標(biāo)的濃度,。

當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體,。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合,。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng),。如抗原為高純度的，可直接包被固相,。如抗原中會有干擾物質(zhì),，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法,，即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,，然后加入抗原，形成固相抗原,。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),，然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭結(jié)合反應(yīng)。競爭法測抗體有多種模式,，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競爭結(jié)合,，抗HBc ELISA一般采用此法,。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結(jié)合,，洗滌后再加入酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng),?？笻Be的檢測一般采用此法。