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谷氨酸脫氫酶（GLDH）ELISA 試劑盒

競爭法

1. 競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,，一般用于檢測小分子抗原,，其操作步驟為：

2. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗體

3. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

4. 加入帶有酶的抗原,，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié),，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當檢體中抗原的量越多,，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),，即所謂競爭法之由來,。

5. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色,，當檢體中抗原量越多,，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺,。

   當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA,。

   谷氨酸脫氫酶（GLDH）ELISA 試劑盒

6. 應用于ELISA

   親和素是一種糖蛋白,，可由蛋清中提取。分子量60kD,，每個分子由4個亞基組成,，可以和4個生物素分子親密結(jié)合,。維生素H，分子量244.31,，存在于蛋黃中,。用化學方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide,，BNHS）可與蛋白質(zhì),、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合,，雖不屬免疫反應,，但特異性強，親和力大,，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定,。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子,，形成一種類似晶格的復合體,。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，就可大提高ELISA的敏感度,。

   親和素－生物素系統(tǒng)在ELISA中的應用有多種形式,，可用于間接包被，亦可用于終反應放大,?？梢栽诠滔嗌舷阮A包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合,，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化,。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結(jié)合點充分暴露,。另外,，在常規(guī)ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然后連接親和素－酶結(jié)合物,，以放大反應信號,。

8. 工作原理本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測定樣品中的水平,。向預先包被抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的抗體,，經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的組分，然后再加入底物A,、B,，產(chǎn)生藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關,。