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色氨酸羥化酶（Th）ELISA 試劑盒

夾心法

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原,，一般的操作步驟為:

1. 將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

2. 加入待測(cè)檢體,，檢體中若含有待測(cè)的抗原,，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

3. 洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗體,，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

4. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)

5. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,，加入酶底物使酵素呈色,，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

色氨酸羥化酶（Th）ELISA 試劑盒

用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩(wěn)定,；反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn),；能商品化生產(chǎn)。當(dāng)前應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）,、堿性磷酸酶,、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應(yīng)用廣,。

過氧化物酶廣泛分布于植物中,，辣根中含量高，從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶（HRP）,，是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構(gòu)成的一種糖蛋白（含糖量18%）,，分子量約40 000，約由300個(gè)氨基酸組成，等電點(diǎn)為pH 3-9,，催化反應(yīng)的適pH值因供氫體不同而稍有差異,，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液,。酶蛋白和輔基的大吸收光譜分別為275nm和403nm,。

酶的純度以RZ表示：RZ=OD403/OD275

純酶的RZ多在3.0以上，高為3.4,。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶，非酶蛋白約占 75%,，不能用于標(biāo)記,。RZ在2.5以上者方可用于標(biāo)記。HRP的作用底物為過氧化氫,，催化反應(yīng)時(shí)的供氫體有幾種：（1）鄰苯二胺（OPD）,，產(chǎn)物為橙色，可溶性,，敏感性高,，大吸收值在490nm，可用肉眼觀察判別,，容易被濃H2SO4終止反應(yīng),，顏色可在數(shù)小時(shí)內(nèi)不改變,是目前國(guó)內(nèi)ELISA中常用的一種；（2）聯(lián)大茴香胺（OD）,產(chǎn)物為橘黃色,，大吸收值在400nm,，顏色較穩(wěn)定；（3）5－氨基水楊酸（5－AS）：產(chǎn)物為深棕色,，大吸收值在449nm,，部分溶解，敏感性較差,；（4）鄰聯(lián)甲苯胺（OT）產(chǎn)物為藍(lán)色,，大吸收值在630nm，部分溶解,，不穩(wěn)定,，不耐酸，但反應(yīng)快,，顏色明顯,。

工作原理

本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測(cè)定樣品中的水平,。向預(yù)先包被抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的抗體，經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的組分,，然后再加入底物A,、B，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關(guān)。