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催產(chǎn)素（OT）ELISA 試劑盒

⒈　正式試驗(yàn)時(shí),，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。

⒉　在ELISA中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,，其中包括：

⑴　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。當(dāng)前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

⑵ 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,，吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,，一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值大而蛋白量少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。

⑶　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

⑷　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是當(dāng)前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入。

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定性測(cè)定
　　　定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答,，分別用"陽(yáng)性",、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無(wú)反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度,，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn),。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),，呈陽(yáng)性反應(yīng)的高稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性,、弱陽(yáng)性更具定量意義,。

在間接法和夾心法ELISA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔,。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反,，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。