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p53蛋白（p53）ELISA 試劑盒

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,，測定樣品中的水平,。向預先包被抗體的酶標孔中加入標準品,、待測樣本和HRP標記的抗體，經過溫育和洗滌,，去除未結合的組分,，然后再加入底物A、B,，產生藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關,。

p53蛋白（p53）ELISA 試劑盒

注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：100,、50、25、12.5,、6.25,、0 pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標準規(guī)格酶標儀,。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,，

5.   一次性試管

6.   吸水紙

注意事項

1.   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2.   各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差

3.   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測,。

4.   嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

5.   為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜,。

6.   不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。

7.   底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作程序

1.   分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準品孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl,；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘,。

2.   棄去液體,，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。如此重復5次，拍干,。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標板,，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

5.   測定：以空白孔調零,，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

6.   根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算,。應記住由于樣品稀釋了的,，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。