流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)

 流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)
1,、檢測項目：
   （1）細(xì)胞周期細(xì)胞   （2）細(xì)胞凋亡    （3）免疫細(xì)胞分型     （4）表面抗原鑒定          （5）細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測   （6）線粒體功能      （7）細(xì)胞分選
2,、樣本及來源：
    1） 單個細(xì)胞：1~2×106 個細(xì)胞左右,；來源于人,、小鼠、大鼠或其它,。
    2） 外周血：EDTA或肝素抗凝全血,，5ml左右；來源于人,、小鼠,、大鼠或其它。
 
說明：
1,、  實驗所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL,。
2、  送檢樣本量：
        1）,、單個細(xì)胞：1~2×106 個細(xì)胞左右,；來源于人、小鼠,、大鼠或其它,。
        2）,、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右,；來源于人,、小鼠、大鼠或其它,。
3,、  用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測時須提前預(yù)約，同時說明實驗?zāi)康?、方法等,。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個,，每個測試費用為標(biāo)準(zhǔn)收費×2,。
4、  我公司在正式接受實驗委托一周內(nèi)交付實驗結(jié)果,。所提供實驗結(jié)果忠實于樣本的實際情況,。
5、  用戶須一次性全額預(yù)付實驗費,。
6,、  部分常用熒光探針，如PI等,，我公司可免費提供,，；特殊標(biāo)記物,，如CD抗體等,，用戶須另行購買，也可委托我公司代購,；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識別反應(yīng),。
7,、  由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負(fù)責(zé),。
8、  請在表中說明檢測具體要求（可另附頁）,，由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé),。
9、  請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息,，樣品檢測后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存,。
客戶提供：
（1）標(biāo)本:組織、細(xì)胞,、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標(biāo)記）
        PEqiang,，適用于弱表達(dá)抗原
        FITC*便yi,，適用于強表達(dá)抗原，適用范圍廣
        biotin-avidin不適合 弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
 附：流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法：
 
A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：
    （1） ,、收集1×106個細(xì)胞,，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次,。
    （2） ,、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清,。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,，800rpm離心5min。
    （3） ,、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清,。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體（5×105個細(xì)胞/20ul抗體）的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清,。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可,。
    （4） ,、用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
 
B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
    （1）,、收集2×106個細(xì)胞,，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min,。
    （2）,、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞,，800rpm離心5min,；
    （3）、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,，冰上放置10min,800rpm離心5min,。
    （4）、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,，冰上放置40min,800rpm離心5min,，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min,，洗去未結(jié)合一抗,，重復(fù)一次。
    （5）,、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗,，冰上避光放置40min后,，800rpm離心5min，去上清,，PBS洗滌兩次,。
    （6）、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞,；固定待測,。
    （7）、流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞,。
 
C.細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
    （1）、待測樣本制成單細(xì)胞懸液,，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,，棄上清。
    （2）,、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,，4℃保存，至少固定18小時,。
    （3）,、調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液,，用PBS洗三次,，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析,。
    （4）,、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升,。

實驗代做服務(wù)：