大鼠（Rat）還原型谷胱甘肽（GSH）

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被還原型谷胱甘肽（GSH）抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的還原型谷胱甘肽（GSH）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

• 酶標儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
• 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.   試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用,。
2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。
3.   濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,，終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4.   嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。
5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、0.5、1,、2,、4、8 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。
2.   自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.   樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。
4.   除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標,，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值,。

試劑盒性能

•  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900,。
•  靈敏度：低檢測濃度小于0.1 ng/mL,。
•  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
•  重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。
•  貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。
•  有效期：6個月

免責聲明

•   試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔,，本公司概不負責,。
•   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔,。

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