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一,、摘要

波段收集技術(shù)通過觀測用戶自訂的吸光波段來凈化化合物,。數(shù)據(jù)以單一軌跡形式展示,，以便于實(shí)現(xiàn)更有效的分析收集,。此外,，應(yīng)用信號(hào)處理技術(shù)可消除由于溶劑吸收紫外線導(dǎo)致的基線漂移現(xiàn)象。

二,、概述

CombiFlash系統(tǒng)中波段收集功能能夠計(jì)算光電二極管陣列檢測到的所有波長的平均吸光度,。通過對(duì)信號(hào)進(jìn)行處理，可以消除由溶劑吸收引起的基線漂移現(xiàn)象,。這樣便產(chǎn)生了一個(gè)單一的圖譜或是色譜信號(hào),，使得多功能液相色譜或快速色譜系統(tǒng)中的分部收集程序能夠精確地收集以純化產(chǎn)物。在以下情況下,，波段檢測顯得尤為重要：

n化合物或是分析物光譜未知時(shí),，例如從自然產(chǎn)品中提取的化合物。

n當(dāng) 一混合物包含多種不同的吸光度的混合物,，單一波長無法識(shí)別混合物中所有化合物時(shí),。

n當(dāng)洗脫溶劑的吸收光譜與所需化合物的吸收光譜重疊時(shí)。

n當(dāng)具有相似光譜的化合物使檢測器過載,，從而難以正確分離化合物時(shí),。

CombiFlash系統(tǒng)的波段檢測技術(shù)顯著提升了自動(dòng)化提純化合物的能力。以下是幾個(gè)示例以說明這些技術(shù)改進(jìn)的優(yōu)勢(shì),。

示例1：(化合物)混合物

示例2：未知光譜

圖3：圖2中分離的化合物的紫外吸收?qǐng)D譜,。

在圖2中，大部分兒茶素家族化合物不吸收254nm波長的紫外線，但波段收集技術(shù)卻能夠成功檢測并分離該族化合物,。這一技術(shù)手段在處理自然產(chǎn)物時(shí)顯得特別有效,，因?yàn)樵谶M(jìn)行最終純化之前，我們通常無法了解目標(biāo)化合物的吸光度情況,。通常完成分子鑒定之前,，我們尚未了解某特定分子的吸光度。波段收集技術(shù)特別適純化吸收光譜未知的化合物,，因此此技術(shù)在處理天然物顯得特別有效,。

溶劑光譜與化合物光譜重疊

乙酸乙酯和二氯甲烷是快速色譜中常用的兩種溶劑。它們都能吸收250 nm以下的紫外光,，這會(huì)干擾在此波長范圍內(nèi)同樣具有吸收能力的化合物的檢測,，特別是在使用梯度洗脫時(shí)尤為明顯。這種不斷變化的基線也會(huì)妨礙分部收集器準(zhǔn)確切割分部的能力,。

圖4：使用二氯甲烷/甲醇梯度,，通過波段收集技術(shù)純化葡萄糖五乙酸酯。

葡萄糖五乙酸酯在210nm波長的吸光能力較弱,，在圖譜上其吸收更進(jìn)一步被二氯甲烷影響,，因二氯甲烷也會(huì)吸收210波長（參見圖4）。當(dāng)二氯甲烷的濃度降低時(shí),，基線會(huì)向下漂移,。這種漂移通常會(huì)干擾傳統(tǒng)的分部收集程序，但在波段收集技術(shù)面前,，這并不是問題,。波段收集能夠有效地濾除基線漂移，從而為CombiFlash系統(tǒng)中的分部收集器提供一個(gè)穩(wěn)定的基線,。

樣品過載檢測器

在快速色譜中,，樣品負(fù)載過高導(dǎo)致吸光度飽和檢測器是常見情況。若化合物洗脫時(shí)間相近,，這種飽和現(xiàn)象會(huì)使得分部收集器無法準(zhǔn)確分離化合物,，因?yàn)轱柡头鍟?huì)被誤認(rèn)為一個(gè)大的單一峰。

圖5：使用波段收集技術(shù)純化緊密洗脫的飽和峰,。

波段收集技術(shù)能夠測量用戶選定光譜范圍內(nèi)的平均吸光度,，因得以觀測到未飽和的光譜，我們進(jìn)而得以精準(zhǔn)切割分析物的吸收峰,。在圖5中,，通過波段收集技術(shù)成功純化了過載且重疊的兒茶酚和間苯二酚峰。

純化具有相同特性吸收峰的多種化合物

由于波段收集技術(shù)的檢測范圍可以調(diào)節(jié),， 使用者可以輕松分離出具有特殊吸收波段的那些化合物,。這項(xiàng)技術(shù)允許僅僅收集我們感興趣的特定化合物,。雖然我們可以選擇一個(gè)單一波長來完成這項(xiàng)任務(wù)，但波段收集技術(shù)可以設(shè)定一個(gè)特定的波長范圍,，以收集一系列結(jié)構(gòu)相近的化合物,。

圖6: 單一波長技術(shù)可分辨三種吸收254紫外光的化合物。而圖7則展示了利用波段收集技術(shù)進(jìn)行選擇性純化的過程,，其中化合物1和3在295 nm至325 nm的波長范圍內(nèi)有吸收而化合物2不吸收該波段波長,。

圖6：在254 nm處純化化合物。

圖7：運(yùn)用波段收集,，在295至325 nm區(qū)間內(nèi)選擇性提純化合物,。

三、波段收集技術(shù)參數(shù)設(shè)置建議

波段收集技術(shù)的參數(shù)設(shè)置位于CombiFlash系統(tǒng)的方法編輯器界面,。啟動(dòng)波段收集功能后,，便可配置檢測器的各項(xiàng)參數(shù)（參見圖8）?？膳渲玫膮?shù)包括波長范圍（用以濾除溶劑或非目標(biāo)化合物）,、峰寬度、斜率以及閾值,。當(dāng)波長范圍包含無吸光度的區(qū)域雖然會(huì)降低波段收集的靈敏度,，但依舊能夠?qū)崿F(xiàn)化合物的收集。

此外,，使用波段收集時(shí),，建議同時(shí)啟用一個(gè)可以觀測到大多數(shù)分析物（包含雜質(zhì)）吸收光譜的單一檢測器。

圖8：波段收集和單一波長收集的檢測參數(shù),。

四,、波段收集技術(shù)參數(shù)示例

案例1：溶劑在偵測波長范圍內(nèi)無吸收

若選定波長范圍內(nèi)溶劑無吸收，可將峰寬設(shè)為最長八分鐘,。這一設(shè)置同樣適用于等度洗脫,，因基線穩(wěn)定，即使溶劑吸光度落在波段收集選定范圍內(nèi),，仍適用此設(shè)置,。圖1展示了按此技術(shù)進(jìn)行純化的情形。

案例2：溶劑在波長范圍內(nèi)有吸收

如溶劑在選定檢測器范圍內(nèi)吸收（參見圖4）,，則需將波段收集的峰寬設(shè)置為單一波長檢測器峰寬的兩倍,。參見圖8示例。此參數(shù)有助于減少溶劑干擾（參見圖9和圖10）,。

圖9：使用庚烷：丙酮梯度在280 nm收集兒茶酚和間苯二酚,。基線隨著丙酮比例的增加而漂移,。

圖10：使用波段收集技術(shù)在庚烷：丙酮梯度中收集兒茶酚和間苯二酚,。波段收集技術(shù)過濾掉了大部分基線漂移,。

五、結(jié)論

波段收集技術(shù)對(duì)于純化未知吸光度或被溶劑掩蓋吸光度的化合物木及具價(jià)值,。該技術(shù)能夠有效分離那些吸光度超出檢測器承載范圍的峰,，從而提升了CombiFlash系統(tǒng)的自動(dòng)化和無人值守操作特性。

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