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1    微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)簡(jiǎn)介

1.1 Ames試驗(yàn)發(fā)展歷程

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Bacterial Reverse Mutation Test) ，亦稱Ames試驗(yàn),，于1975年由美國(guó)加利福尼亞大學(xué)伯克利分校生化系B.N.Ames教授實(shí)驗(yàn)室建立并不斷發(fā)展完善,，至今已成為世界范圍內(nèi)基因毒性測(cè)試中應(yīng)用最為廣泛的一種方法，通常是體外毒理學(xué)測(cè)試的第一步,，廣泛應(yīng)用于化合物的致突變性和潛在致癌性的初篩檢驗(yàn),。近幾年，將M.H.L. Green等人創(chuàng)建的大腸桿菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)引入其中,，形成現(xiàn)在較為成熟的細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（包括鼠傷寒沙門氏菌細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)和大腸桿菌細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)）,。

1976年Green等通過(guò)改良建立了Ames波動(dòng)試驗(yàn)（Ames Fluctuation Test），它用液體培養(yǎng)基代替固體培養(yǎng)基,，以觀察培養(yǎng)管的濁度或pH指示劑的顏色變化代替菌落計(jì)數(shù),，其敏感性高于Ames試驗(yàn)。

微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)試驗(yàn)（Micro-titre Fluctuation Ames Test）試驗(yàn)是在Ames波動(dòng)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的,，由Gatehouse于1978年改良并不斷推廣,，用96孔培養(yǎng)板進(jìn)行試驗(yàn)，以觀察pH指示劑的顏色變化指示結(jié)果,，提高了靈敏度,、并降低了化合物的用量。

后來(lái),，Gee等通過(guò)開(kāi)發(fā)新菌株,，建立了AmesⅡ試驗(yàn)，Gee等開(kāi)發(fā)的6種沙門氏菌株（TA7001～TA7006）在組氨酸合成操縱子上各有一個(gè)*的點(diǎn)突變,，這6種點(diǎn)突變包含了所有點(diǎn)突變的可能性,，將6種菌株混合在一起（Tamix），即能夠檢測(cè)出所有可以誘發(fā)點(diǎn)突變的化合物，再配合一種傳統(tǒng)Ames試驗(yàn)中采用的菌株TA98（用于檢測(cè)移碼突變）,，就可以檢測(cè)出可以誘發(fā)點(diǎn)突變和移碼突變的化合物,。

1.2 傳統(tǒng)Ames試驗(yàn)與微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)比較

傳統(tǒng) Ames 試驗(yàn)是對(duì)致癌物預(yù)測(cè)性遺傳毒性試驗(yàn)，是藥物遺傳毒性初篩的方法,，也是QSAR構(gòu)效關(guān)系建立的遺傳毒性數(shù)據(jù)庫(kù)的重要數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。傳統(tǒng)的Ames平板滲入法采用半固體培養(yǎng)液,，在有外源致突變物存在的情況下,，組氨酸/色氨酸缺陷型菌株發(fā)生回復(fù)突變，回復(fù)為野生型,，可在無(wú)組/色氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),，故可根據(jù)菌落形成數(shù)量，檢查受試物是否為致突變物,。然而,，開(kāi)展傳統(tǒng)的Ames試驗(yàn)需4~5種菌株，試驗(yàn)過(guò)程涉及到培養(yǎng)大量的瓊脂平板以及繁復(fù)的平板菌落計(jì)數(shù)等,，耗費(fèi)實(shí)驗(yàn)材料多,，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且受試化合物用量大,，敏感性低的缺點(diǎn),。

相比傳統(tǒng)的Ames試驗(yàn)方法，微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)采用了液態(tài)96孔板培養(yǎng)的方法,，在微孔板中進(jìn)行受試物和菌株的孵育,，利用培養(yǎng)基中的特殊指示劑溴甲酚紫顯色。當(dāng)孔中有回復(fù)突變的菌株生長(zhǎng)使培養(yǎng)基pH值降低時(shí),，指示劑由紫色變?yōu)辄S色,。外源化合物致突變能力越強(qiáng)，變色的孔數(shù)越多,。通常,，微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)選用TA98和TA100兩種菌株作為測(cè)試菌株，試驗(yàn)結(jié)果可通過(guò)計(jì)數(shù)變色的孔數(shù)或用酶標(biāo)儀直接讀數(shù),，省去了平板菌落計(jì)數(shù)的繁瑣和耗時(shí)的過(guò)程,，且因其試驗(yàn)的全液體環(huán)境，使得試驗(yàn)靈敏度更高,。

1.3 微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)

l  高通量

微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)過(guò)計(jì)數(shù)黃色孔的數(shù)量來(lái)反映受試物的致突變性,，從而省去了平板制作和菌落計(jì)數(shù)等步驟，可實(shí)現(xiàn)高通量,、自動(dòng)化,，具有節(jié)省耗材、節(jié)約藥量、縮短試驗(yàn)周期,、結(jié)果客觀,、適宜大量藥物篩選的優(yōu)點(diǎn)。

l  高靈敏度

波動(dòng)試驗(yàn)比平板試驗(yàn)靈敏,，其主要原因可能是：①在波動(dòng)試驗(yàn)中細(xì)菌可在低濃度的誘變劑中處理較長(zhǎng)時(shí)間,；在平板試驗(yàn)中受測(cè)化學(xué)物將擴(kuò)散至底層瓊脂而被稀釋，因此產(chǎn)生同樣效應(yīng)需更高的起始濃度,，而有些化學(xué)物濃度增高后又會(huì)導(dǎo)致毒性效應(yīng),。②液體培養(yǎng)有利于S9組份酶活性的正常發(fā)揮，在平板試驗(yàn)中可溶性酶擴(kuò)散入底層瓊脂會(huì)擾亂酶的代謝活力,。

l  化合物用量少

Ames波動(dòng)試驗(yàn)是用96孔板進(jìn)行試驗(yàn),，化合物用量少，可作為新藥開(kāi)發(fā)的早期,，受試物樣品種類多,、產(chǎn)量少或受試物較珍貴時(shí)評(píng)價(jià)遺傳毒性的快速方法。

2    IPHASE微量波動(dòng)Ames試劑盒

IPHASE/匯智和源順應(yīng)遺傳毒理研究的需求,，通過(guò)多年的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化,，推出了微量波動(dòng)Ames試劑盒，為遺傳毒理學(xué)研究提供了便捷的產(chǎn)品,。

圖1 IPHASE微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)試劑盒試驗(yàn)結(jié)果

2.1 微量波動(dòng)Ames試劑盒組成

 IPHASE/匯智和源微量波動(dòng)Ames試劑盒由A盒和B盒兩個(gè)包裝組成,，包含了進(jìn)行試驗(yàn)所需的所有試劑和主要耗材,，使用簡(jiǎn)單,、便捷,。

2.2   微量波動(dòng)Ames試劑盒優(yōu)勢(shì)

l  便捷性 

省去誘導(dǎo)S9制備,、菌株培養(yǎng)和鑒定,、試劑配制時(shí)間，可以直接使用,，大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期,。

l  準(zhǔn)確性 

試劑盒各成分均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè),，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,、可靠,、重現(xiàn)性高,。

l  高效性 

利用顯色原理判斷受試物的致突變性，大大減少計(jì)數(shù)工作,。

l  穩(wěn)定性 

本試劑盒穩(wěn)定性強(qiáng),、易于運(yùn)輸和保存,。

l  應(yīng)用廣 

應(yīng)用范圍廣，可用于食品,、藥品,、化妝品、化學(xué)品,、保健品、農(nóng)藥等的遺傳毒性研究

3    相關(guān)產(chǎn)品

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域,、多種類的科研試劑,，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具,，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料,、新方法和新手段,，為食品,、藥品,、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品,。

關(guān)    于    我    們

匯智和源,，致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,，IPHASE為公司核心品牌,，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

• AmesⅡ試劑盒

  所需試劑在線詢價(jià)
• Ames試劑盒（Ames試驗(yàn)）

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• 彗星試驗(yàn)試劑盒CometAssay

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• 遺傳毒性Ames預(yù)制培養(yǎng)基平板

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• 微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)（Mini-Ames）試劑盒

  所需試劑在線詢價(jià)