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骨髓單個(gè)核細(xì)胞（Bone Marrow Mononuclear Cells,，BMMNCs）是一群混合細(xì)胞,，其中絕大多數(shù)是早幼粒細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞,、成熟B細(xì)胞,、T細(xì)胞和單核細(xì)胞等，還含有少量的干細(xì)胞,，包括間充質(zhì)干細(xì)胞,、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等，它們密度相近,，因此可通過(guò)密度梯度離心法從骨髓液中分離出來(lái),。

1    原理

單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,，在沉降過(guò)程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置,。因此，可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來(lái),。

2    方法

1）  無(wú)菌條件下抽取骨髓于含抗凝劑的采血管內(nèi),，將骨髓與生理鹽水或PBS溶液按等比例混勻，備用,。

2）  按照稀釋骨髓：細(xì)胞分離液比例為3:2的比例,，緩慢將稀釋骨髓液加入到細(xì)胞分離液上層，需保持液面分界清晰,。

3）  800g,，室溫，離心 20min-30min（注：設(shè)置較慢的加速度和減速度,，如果有十檔,，設(shè)為第三檔）。

4）  小心吸取骨髓單個(gè)核細(xì)胞層（即白膜層）并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,。離心結(jié)束后,，管內(nèi)液面從上至下依次為無(wú)細(xì)胞骨髓液層、骨髓單個(gè)核細(xì)胞層,、分離液層和紅細(xì)胞層（見圖1）,。

圖1 稀釋骨髓液離心前后的分層狀態(tài)圖

5）  向離心管中加入10mL 的生理鹽水或PBS重懸細(xì)胞，250g,，室溫離心 10min ,，棄上清,。重復(fù)該步驟 1~2 次，即可用于后續(xù)試驗(yàn),。

3    注意事項(xiàng)

1）  不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,，請(qǐng)選擇合適的分離液進(jìn)行骨髓單個(gè)核細(xì)胞的分離。

2）  骨髓液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,，請(qǐng)盡量使用采集后24小時(shí)內(nèi)的骨髓液進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離,。

3）  為保證細(xì)胞的活力，整個(gè)操作過(guò)程請(qǐng)輕柔,，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷,。

4）  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好，請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期,。

4    臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒

IPHASE/匯智和源針對(duì)不同種屬動(dòng)物骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn),，開發(fā)了對(duì)應(yīng)的單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒，包括人,，猴,，犬，大鼠,，小鼠,，兔，豬等,。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分,，各成分對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài),；同時(shí),，該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷，可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間,，分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好,、得率高,。

5    相關(guān)產(chǎn)品

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• 骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒

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