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骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離方法及注意事項(xiàng)
檢測(cè)樣品:骨髓單個(gè)核細(xì)胞
檢測(cè)項(xiàng)目:骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離方法
方案概述:骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BoneMarrowMononuclearCells,,BMMNCs)是一群混合細(xì)胞,其中絕大多數(shù)是早幼粒細(xì)胞,、早幼紅細(xì)胞,、成熟B細(xì)胞、T細(xì)胞和單核細(xì)胞等,,還含有少量的干細(xì)胞,,包括間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等,它們密度相近,,因此可通過(guò)密度梯度離心法從骨髓液中分離出來(lái),。
骨髓單個(gè)核細(xì)胞(Bone Marrow Mononuclear Cells,BMMNCs)是一群混合細(xì)胞,,其中絕大多數(shù)是早幼粒細(xì)胞,、早幼紅細(xì)胞、成熟B細(xì)胞,、T細(xì)胞和單核細(xì)胞等,,還含有少量的干細(xì)胞,包括間充質(zhì)干細(xì)胞,、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等,,它們密度相近,因此可通過(guò)密度梯度離心法從骨髓液中分離出來(lái),。
1 原理
單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,,在沉降過(guò)程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置,。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開來(lái),。
2 方法
1) 無(wú)菌條件下抽取骨髓于含抗凝劑的采血管內(nèi),,將骨髓與生理鹽水或PBS溶液按等比例混勻,備用,。
2) 按照稀釋骨髓:細(xì)胞分離液比例為3:2的比例,,緩慢將稀釋骨髓液加入到細(xì)胞分離液上層,需保持液面分界清晰,。
3) 800g,,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,,如果有十檔,,設(shè)為第三檔)。
4) 小心吸取骨髓單個(gè)核細(xì)胞層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,。離心結(jié)束后,,管內(nèi)液面從上至下依次為無(wú)細(xì)胞骨髓液層、骨髓單個(gè)核細(xì)胞層,、分離液層和紅細(xì)胞層(見圖1),。
圖1 稀釋骨髓液離心前后的分層狀態(tài)圖
5) 向離心管中加入10mL 的生理鹽水或PBS重懸細(xì)胞,250g,,室溫離心 10min ,,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗(yàn),。
3 注意事項(xiàng)
1) 不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,,請(qǐng)選擇合適的分離液進(jìn)行骨髓單個(gè)核細(xì)胞的分離。
2) 骨髓液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,,請(qǐng)盡量使用采集后24小時(shí)內(nèi)的骨髓液進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離,。
3) 為保證細(xì)胞的活力,整個(gè)操作過(guò)程請(qǐng)輕柔,,避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷,。
4) 為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期,。
4 臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒
IPHASE/匯智和源針對(duì)不同種屬動(dòng)物骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn),,開發(fā)了對(duì)應(yīng)的單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒,包括人,,猴,,犬,大鼠,,小鼠,,兔,豬等,。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分,,各成分對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài),;同時(shí),,該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷,可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間,,分離所得細(xì)胞純度高,、狀態(tài)好、得率高,。
5 相關(guān)產(chǎn)品
關(guān) 于 我 們
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