白介素-8 ELISA KIT 

白介素-8 ELISA KIT 是科研及臨床前期研究中常用的檢測(cè)工具，用于定量測(cè)定多種生物樣本中的白介素 - 8（IL-8）含量 ,。

1. 檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法,。試劑盒的微孔板上預(yù)包被了針對(duì) IL-8 的特異性抗體。加入樣本后,，樣本中的 IL-8 與固相抗體結(jié)合,。接著加入酶標(biāo)記的抗 IL-8 抗體，其與已結(jié)合在固相上的 IL-8 形成 “固相抗體 - IL-8 - 酶標(biāo)抗體” 復(fù)合物,。經(jīng)過(guò)洗滌去除未結(jié)合物質(zhì),，加入底物溶液（如 TMB），在酶的催化下,，底物發(fā)生顯色反應(yīng),，顏色深淺與樣本中 IL-8 的含量成正比。通過(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（通常為 450nm）下測(cè)量吸光度,，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,，從而計(jì)算出樣本中 IL-8 的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：已包被抗 IL-8 抗體,，有 96 孔或 48 孔規(guī)格,，是反應(yīng)的載體,。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：一般為凍干品，需用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶并稀釋成不同濃度梯度,，如 0,、31.2、62.5,、125,、250、500,、1000 pg/mL 等,，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過(guò)高的待測(cè)樣本,，確保其濃度在試劑盒的檢測(cè)范圍內(nèi),。

• 酶標(biāo)抗體：即 HRP 標(biāo)記的抗 IL-8 抗體，為濃縮液,，使用時(shí)需按要求用酶標(biāo)抗體稀釋液稀釋,。

• 酶標(biāo)抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標(biāo)抗體。

• 底物溶液：如 TMB 底物,，與酶標(biāo)抗體中的 HRP 發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化,。

• 洗滌液：通常為濃縮液，使用時(shí)需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋,，用于洗滌酶聯(lián)板,，去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景干擾,。

• 終止液：一般為強(qiáng)酸溶液（如硫酸）,，用于終止底物的顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液顏色穩(wěn)定,，便于讀數(shù) ,。

• 封板膜：用于在溫育過(guò)程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 ,。

• 使用說(shuō)明書：詳細(xì)介紹試劑盒的使用方法,、注意事項(xiàng)、性能指標(biāo)等 ,。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后,，室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜，1000×g 離心 20 分鐘,，取上清備用,。采血應(yīng)使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用 EDTA,、肝素等抗凝劑,。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清 ,。

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)上清 1000×g 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)后取上清 ,。

• 組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS 沖洗組織，去除殘留血液,，剪碎組織后按 1:9（w/v）加入 PBS，冰上充分研磨,。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測(cè) ,。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測(cè)，可 4℃保存,；若長(zhǎng)時(shí)間保存,，需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復(fù)凍融,，溶血樣本一般不適合檢測(cè) 。

4. 操作流程

• 準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒,，平衡至室溫（約 30 分鐘）,。稀釋濃縮洗滌液,。

• 加樣：設(shè)置空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔?？瞻卓准訕颖緓i釋液,，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,，樣本孔加入處理好的樣本,，每孔加樣量通常為 100μL,，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 ,。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔,，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干,，重復(fù)洗滌 5 次,，確保洗凈未結(jié)合物質(zhì) ,。

• 加酶標(biāo)抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標(biāo)抗體工作液,，37℃溫育 60 分鐘 ,。

• 再次洗滌：同上述洗滌步驟 ,。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻,，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（根據(jù)實(shí)際顯色情況判斷） ,。

• 終止反應(yīng)：每孔加入 50μL 終止液,，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色 ,。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） ,。

• 計(jì)算結(jié)果：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。根據(jù)樣本的 OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的濃度，若樣本進(jìn)行了稀釋,，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度 ,。

5. 性能指標(biāo)

• 檢測(cè)范圍：常見(jiàn)為 31.2 - 2000 pg/mL 等不同區(qū)間,，能滿足多種樣本中 IL-8 含量的檢測(cè)需求 。

• 靈敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低,，能檢測(cè)到樣本中微量的 IL-8 ,。

• 特異性：對(duì) IL-8 具有高度特異性,，與其他細(xì)胞因子等物質(zhì)無(wú)明顯交叉反應(yīng) 。

• 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%,，板間變異系數(shù)小于 15%,，保證了檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性 。

6. 注意事項(xiàng)

• 嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,，不同批次試劑盒試劑不能混用 ,。

• 操作過(guò)程中使用一次性吸頭，避免交叉污染,，加樣要準(zhǔn)確 ,。

• 洗滌充分是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵,，洗板不che底易導(dǎo)致假陽(yáng)性 。

• 底物溶液對(duì)光敏感,，需避光保存和使用,，顯色反應(yīng)要在避光條件下進(jìn)行 ,。

• 終止液有腐蝕性，操作時(shí)注意防護(hù),，避免接觸皮膚和眼睛 ,。

• 建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均做復(fù)孔檢測(cè)，以提高結(jié)果準(zhǔn)確性 ,。該試劑盒僅用于科研,，不可用于臨床診斷 。