白介素-8 ELISA KIT 

白介素-8 ELISA KIT 是科研及臨床前期研究中常用的檢測工具,，用于定量測定多種生物樣本中的白介素 - 8（IL-8）含量 ,。

1. 檢測原理：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法。試劑盒的微孔板上預包被了針對 IL-8 的特異性抗體,。加入樣本后,，樣本中的 IL-8 與固相抗體結合。接著加入酶標記的抗 IL-8 抗體,，其與已結合在固相上的 IL-8 形成 “固相抗體 - IL-8 - 酶標抗體” 復合物,。經(jīng)過洗滌去除未結合物質，加入底物溶液（如 TMB）,，在酶的催化下,，底物發(fā)生顯色反應，顏色深淺與樣本中 IL-8 的含量成正比,。通過酶標儀在特定波長（通常為 450nm）下測量吸光度,，與標準曲線對比，從而計算出樣本中 IL-8 的濃度 ,。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：已包被抗 IL-8 抗體,，有 96 孔或 48 孔規(guī)格，是反應的載體,。

• 標準品：一般為凍干品,，需用試劑盒提供的標準品稀釋液復溶并稀釋成不同濃度梯度,，如 0,、31.2、62.5,、125,、250、500,、1000 pg/mL 等,，用于繪制標準曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本,，確保其濃度在試劑盒的檢測范圍內,。

• 酶標抗體：即 HRP 標記的抗 IL-8 抗體,，為濃縮液，使用時需按要求用酶標抗體稀釋液稀釋,。

• 酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體,。

• 底物溶液：如 TMB 底物，與酶標抗體中的 HRP 發(fā)生反應產(chǎn)生顏色變化,。

• 洗滌液：通常為濃縮液,，使用時需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板,，去除未結合的物質,，減少背景干擾。

• 終止液：一般為強酸溶液（如硫酸）,，用于終止底物的顯色反應,，使反應液顏色穩(wěn)定，便于讀數(shù) ,。

• 封板膜：用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板,，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法,、注意事項,、性能指標等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后,，室溫放置 2 小時或 4℃過夜,，1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用,。采血應使用無熱原,、無內毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用 EDTA,、肝素等抗凝劑,。樣本采集后 30 分鐘內，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清 ,。

• 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質后取上清 ,。

• 組織勻漿：用預冷的 PBS 沖洗組織,，去除殘留血液，剪碎組織后按 1:9（w/v）加入 PBS,，冰上充分研磨,。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。

• 樣本采集后若短期內檢測,，可 4℃保存,；若長時間保存，需 - 20℃或 - 80℃凍存,，且避免反復凍融,，溶血樣本一般不適合檢測 。

4. 操作流程

• 準備工作：從冰箱取出試劑盒,，平衡至室溫（約 30 分鐘）,。稀釋濃縮洗滌液。

• 加樣：設置空白孔,、標準品孔和樣本孔,。空白孔加樣本xi釋液,，標準品孔加入不同濃度的標準品,，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL,，輕輕混勻,，37℃溫育 90 分鐘 。

• 洗滌：棄去孔內液體,，用洗滌液加滿各孔,，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次,，確保洗凈未結合物質 ,。

• 加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 ,。

• 再次洗滌：同上述洗滌步驟 ,。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻,，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（根據(jù)實際顯色情況判斷） ,。

• 終止反應：每孔加入 50μL 終止液，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 ,。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內,，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 計算結果：以標準品濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，繪制標準曲線。根據(jù)樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應的濃度,，若樣本進行了稀釋，需乘以相應的稀釋倍數(shù)得到實際濃度 。

5. 性能指標

• 檢測范圍：常見為 31.2 - 2000 pg/mL 等不同區(qū)間,，能滿足多種樣本中 IL-8 含量的檢測需求 ,。

• 靈敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低，能檢測到樣本中微量的 IL-8 ,。

• 特異性：對 IL-8 具有高度特異性,，與其他細胞因子等物質無明顯交叉反應 ,。

• 重復性：板內變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%,，保證了檢測結果的穩(wěn)定性和可靠性 。

6. 注意事項

• 嚴格按照說明書操作,，不同批次試劑盒試劑不能混用 ,。

• 操作過程中使用一次性吸頭，避免交叉污染,，加樣要準確 ,。

• 洗滌充分是保證結果準確的關鍵，洗板不che底易導致假陽性 ,。

• 底物溶液對光敏感,，需避光保存和使用，顯色反應要在避光條件下進行 ,。

• 終止液有腐蝕性,，操作時注意防護，避免接觸皮膚和眼睛 ,。

• 建議標準品和樣本均做復孔檢測,，以提高結果準確性 。該試劑盒僅用于科研,，不可用于臨床診斷 ,。