白介素-6受體ELISA KIT

白介素-6受體ELISA KIT是科研中用于定量檢測(cè)生物樣本里白介素 - 6 受體含量的工具。IL-6R 在免疫調(diào)節(jié),、炎癥反應(yīng)進(jìn)程里作用關(guān)鍵,，檢測(cè)其含量對(duì)相關(guān)研究意義重大。

1. 檢測(cè)原理：試劑盒多采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法,。在酶聯(lián)板上預(yù)包被針對(duì) IL-6R 的特異性抗體,。加入樣本后，樣本中的 IL-6R 與固相抗體特異性結(jié)合,。接著加入酶標(biāo)記的抗 IL-6R 抗體,，其與已結(jié)合在固相抗體上的 IL-6R 形成 “固相抗體 - IL-6R - 酶標(biāo)抗體” 復(fù)合物。經(jīng)過(guò)充分洗滌去除未結(jié)合物質(zhì),，加入底物溶液（如 TMB）,，在酶的催化下，底物發(fā)生顯色反應(yīng),，顏色深淺與樣本中 IL-6R 的含量成正比,。通過(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（一般為 450nm）下測(cè)量吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,，計(jì)算出樣本中 IL-6R 的濃度 ,。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：96 孔或 48 孔，已預(yù)包被抗 IL-6R 抗體,，是反應(yīng)發(fā)生的載體 ,。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：一般為凍干品，有 2 瓶,。臨用前需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶,，并稀釋成不同濃度梯度，如 0,、31.2,、62.5、125,、250,、500、1000 pg/mL 等,，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 ,。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過(guò)高的待測(cè)樣本，確保樣本濃度處于試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi) 。

• 酶標(biāo)抗體：即 HRP 標(biāo)記的抗 IL-6R 抗體,，為濃縮液,，使用時(shí)需按要求用酶標(biāo)抗體稀釋液稀釋 。

• 酶標(biāo)抗體xi釋液：專門用于稀釋酶標(biāo)抗體 ,。

• 底物溶液：如 TMB 底物,，可與酶標(biāo)抗體中的 HRP 發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化 ,。

• 洗滌液：通常為濃縮液,，使用時(shí)需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板,，去除未結(jié)合的物質(zhì),，降低背景干擾 。

• 終止液：多為強(qiáng)酸溶液（如硫酸）,，用于終止底物的顯色反應(yīng),，使反應(yīng)液顏色穩(wěn)定，便于讀數(shù) ,。

• 封板膜：用于在溫育過(guò)程中覆蓋酶聯(lián)板,，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說(shuō)明書：詳細(xì)介紹試劑盒的使用方法,、注意事項(xiàng),、性能指標(biāo)等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后,，室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜,，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用,。采血應(yīng)使用無(wú)熱原,、無(wú)內(nèi)毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用乙二胺四乙酸（EDTA）,、肝素等作為抗凝劑,。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，在 2 - 8℃下以 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清 ,。

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)后,，取上清用于檢測(cè) ,。

• 組織勻漿：用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01M,，pH = 7.4）沖洗組織,，去除殘留血液,。剪碎組織后，按照約 1:9（w/v）的比例加入 PBS,，在冰上充分研磨,。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測(cè) ,。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測(cè),，可保存于 4℃；若需長(zhǎng)時(shí)間保存,，需置于 - 20℃或 - 80℃凍存,，且要避免反復(fù)凍融，溶血樣本一般不適合用于檢測(cè) ,。

4. 操作流程

• 準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒，提前 30 分鐘使其平衡至室溫,。同時(shí),，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 。

• 加樣：設(shè)置空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,。空白孔加入樣本xi釋液,，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL,，輕輕混勻,，37℃溫育 90 分鐘 。

• 洗滌：溫育結(jié)束后,，棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干,，重復(fù)洗滌 5 次,，確保che底洗凈未結(jié)合物質(zhì) 。

• 加酶標(biāo)抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標(biāo)抗體工作液,，37℃溫育 60 分鐘 ,。

• 再次洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液,，輕輕混勻,，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（需根據(jù)實(shí)際顯色情況判斷） 。

• 終止反應(yīng)：每孔加入 50μL 終止液,，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色 ,。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi),，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 計(jì)算結(jié)果：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本的 OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的濃度,，若樣本進(jìn)行了稀釋,，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，從而得到實(shí)際濃度 ,。

5. 性能指標(biāo)

• 檢測(cè)范圍：不同試劑盒有所差異,，常見(jiàn)的檢測(cè)范圍為 31.2 - 2000 pg/mL 等區(qū)間，可滿足多種樣本中 IL-6R 含量的檢測(cè)需求 ,。

• 靈敏度：一般可低至 15.6 pg/mL 甚至更低,，能夠檢測(cè)到樣本中微量的 IL-6R 。

• 特異性：對(duì) IL-6R 具有高度特異性,，與其他細(xì)胞因子受體等物質(zhì)幾乎無(wú)交叉反應(yīng) ,。

• 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%,，保證了檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性 ,。

6. 注意事項(xiàng)

• 嚴(yán)格依照說(shuō)明書操作，不同批次試劑盒的試劑不可混用 ,。

• 操作時(shí)使用一次性吸頭,，防止交叉污染，加樣務(wù)必精準(zhǔn) ,。

• 充分洗滌是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵,，洗板不che底易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果 。

• 底物溶液對(duì)光敏感,，需避光保存和使用,，顯色反應(yīng)要在避光條件下進(jìn)行 。

• 終止液具有腐蝕性,，操作時(shí)注意做好防護(hù),，避免接觸皮膚和眼睛 。

• 建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均做復(fù)孔檢測(cè),，以提高結(jié)果的準(zhǔn)確性 ,。該試劑盒僅用于科研用途，不可用于臨床診斷 ,。