白介素5受體（可溶性）ELISA KIT

白介素5受體（可溶性）ELISA KIT是用于定量檢測生物樣本中可溶性白介素 5 受體含量的工具,，在科研領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，有助于深入了解免疫調(diào)節(jié),、炎癥反應等生理病理過程,。以下從多方面為你介紹：

1. 檢測原理：運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)。試劑盒的酶聯(lián)板預先包被了針對可溶性白介素 5 受體的特異性抗體,。當加入樣本后,，樣本中的可溶性白介素 5 受體與固相抗體特異性結(jié)合。接著加入酶標記的抗可溶性白介素 5 受體抗體,，其與已結(jié)合在固相抗體上的受體形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 5 受體 - 酶標抗體” 復合物,。經(jīng)過充分洗滌，去除未結(jié)合的物質(zhì),，然后加入底物溶液（如 3,3',5,5'- 四甲基聯(lián)苯胺,，即 TMB）。在酶標抗體中酶的催化下,，底物發(fā)生顯色反應,，顏色的深淺與樣本中可溶性白介素 5 受體的含量成正比。通過酶標儀在特定波長（通常為 450nm）下測量吸光度,，與標準曲線進行對比,，即可計算出樣本中該受體的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：有 96 孔或 48 孔的規(guī)格,，已預包被抗可溶性白介素 5 受體抗體,，是反應的載體。

• 標準品：通常為凍干品,，一般配備 2 瓶,。臨用前需用標準品稀釋液進行復溶，并稀釋成不同濃度梯度,，例如 0,、15.6、31.2,、62.5,、125、250,、500,、1000 pg/mL 等,，用于繪制標準曲線 。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本,，確保樣本濃度處于試劑盒的有效檢測范圍內(nèi) ,。

• 酶標抗體：即 HRP（辣根過氧化物酶）標記的抗可溶性白介素 5 受體抗體，為濃縮液,，使用時需按要求用酶標抗體稀釋液進行稀釋 ,。

• 酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體 。

• 底物溶液：如 TMB 底物,，可與酶標抗體中的 HRP 發(fā)生反應,，從而產(chǎn)生顏色變化 。

• 洗滌液：一般為濃縮液,，使用時需按一定比例用蒸餾水或去離子水稀釋,，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合的物質(zhì),，降低背景干擾 ,。

• 終止液：多為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應,，使反應液顏色穩(wěn)定,，便于讀數(shù) 。

• 封板膜：在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板,，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法,、注意事項,、性能指標等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后,，室溫放置 2 小時或 4℃過夜,，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用,。采血應使用無熱原,、無內(nèi)毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用乙二胺四乙酸（EDTA）,、肝素等作為抗凝劑,。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，在 2 - 8℃下以 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清 ,。

• 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質(zhì)后,，取上清用于檢測 ,。

• 組織勻漿：用預冷的磷酸鹽緩沖液（PBS,，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織,，去除殘留血液,。剪碎組織后，按照約 1:9（w/v）的比例加入 PBS,，在冰上充分研磨,。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 ,。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測,，可保存于 4℃；若需長時間保存,，需置于 - 20℃或 - 80℃凍存,，且要避免反復凍融，溶血樣本一般不適合檢測 ,。

4. 操作流程

• 準備工作：從冰箱取出試劑盒,，提前 30 分鐘使其平衡至室溫。同時,，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 ,。

• 加樣：設(shè)置空白孔、標準品孔和樣本孔,?？瞻卓准尤霕颖緓i釋液，標準品孔加入不同濃度的標準品,，樣本孔加入處理好的樣本,，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻,，37℃溫育 90 分鐘 ,。

• 洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌液加滿各孔,，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次,，確保che底洗凈未結(jié)合物質(zhì) ,。

• 加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 ,。

• 再次洗滌：重復上述洗滌步驟 ,。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（需根據(jù)實際顯色情況判斷） ,。

• 終止反應：每孔加入 50μL 終止液,，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi),，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） ,。

• 計算結(jié)果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標,，繪制標準曲線,。根據(jù)樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應的濃度，若樣本進行了稀釋,，需乘以相應的稀釋倍數(shù),，從而得到實際濃度 。