上海乾思生物科技中心,，為您精心研發(fā),、細(xì)胞株產(chǎn)品,。我們就是要做一件事，服務(wù)好廣大的科研大眾。
產(chǎn)品名稱:anti-CMV IgG ELISA。

類別 :ELISA
貨期 :7-10天
anti-CMV IgG ELISA,。注意事項(xiàng)：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月,。部分標(biāo)本需添加抑肽酶,。
1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染,。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí),，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí),，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣,。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度,。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的讀數(shù),。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí),，一次不要小于10μl),，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響光密度讀數(shù),。
7.  底物：底物請避光保存,，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定,，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù),。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。
2.  自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。
液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀,。包括,、、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的或。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇      ：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      ：
應(yīng)根據(jù)的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      尿液,、胸腹水,、腦脊液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶),。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1,、標(biāo)本編號(hào)；2,、所測項(xiàng)目,；3、是否做復(fù)孔,；4,、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回

anti-CMV IgG ELISA 安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
2）實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3）不要用嘴吸取里的任何成份。

anti-CMV IgG ELISA 操作注意事項(xiàng)
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時(shí)間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9）按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

anti-CMV IgG ELISA 樣品收集,、處理及保存方法
1）-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2）-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

anti-CMV IgG ELISA 試劑的準(zhǔn)備
1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

anti-CMV IgG ELISA 操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。
一些好評
辦事效率蠻高,，幾天,，就幫我搞定了這個(gè)，謝謝,！盒子蠻不錯(cuò),，包含所需試劑，并提供了中英文雙版說明書及增值稅，很,，銷售人員的態(tài)度也謙和,。靈敏度不錯(cuò)，重復(fù)性也行,，在我做的這些實(shí)驗(yàn)中,，與國內(nèi)同行的盒子相比來說，性價(jià)比挺高的,，尤其是價(jià)格占有不錯(cuò)的優(yōu)勢,，贊一個(gè)！操作挺方便的,，也簡單,，當(dāng)然，這也多虧了公司的技術(shù)人員詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),，很好,，謝謝，實(shí)驗(yàn)也相當(dāng)成功,。實(shí)驗(yàn)出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線很不錯(cuò)（很優(yōu)美）,，而且價(jià)格相對合理，技術(shù)指導(dǎo)很到位......我購買了兩盒,，批次新,，保質(zhì)期內(nèi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出來了,，貨到的挺快,，那么遠(yuǎn)，幾天就到了,，加上我做實(shí)驗(yàn),，一共五天就搞定了。經(jīng)朋友介紹,，購買了此公司的ELISA，用過,，還不錯(cuò),，實(shí)驗(yàn)效果很好，基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)參數(shù)要求,，如果,，下次還做實(shí)驗(yàn)的話，我還買這家的,，朋友這幾年都在用這家的（長期訂貨）,。
anti-CMV IgG ELISA 局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
anti-CMV IgG ELISA 性能
1. 靈敏度：小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

anti-CMV IgG ELISA  結(jié)果判斷與分析
1,、儀器值：于波長450nm的上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線,，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

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