白介素7受體（可溶性）ELISA KIT

白介素7受體（可溶性）ELISA KIT,，是一款用于定量檢測生物樣本中可溶性白介素 7 受體含量的工具,，在免疫學研究等領域應用廣泛。

1. 檢測原理：采用雙抗體夾心 ELISA 法,。試劑盒中的微孔板已預包被針對可溶性白介素 7 受體的特異性抗體,。當加入樣本后，樣本里的可溶性白介素 7 受體與固相抗體相結(jié)合,。隨后加入酶標記的抗可溶性白介素 7 受體抗體,，其會和已結(jié)合在固相上的受體形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 7 受體 - 酶標抗體” 復合物,。經(jīng)過洗滌步驟去除未結(jié)合物質(zhì),，再加入底物溶液（如 TMB），在酶的催化作用下,，底物發(fā)生顯色反應,，顏色的深淺與樣本中可溶性白介素 7 受體的含量成正比。通過酶標儀在特定波長（一般為 450nm）下測量吸光度,，與標準曲線進行對比,，就能計算出樣本中該受體的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：96 孔或 48 孔,，預包被抗可溶性白介素 7 受體抗體,，是反應的載體 ,。

• 標準品：通常為凍干品，有 2 瓶,。臨用前需用標準品稀釋液復溶并稀釋成不同濃度梯度,，如 0、31.2,、62.5,、125、250,、500,、1000 pg/mL 等，用于繪制標準曲線 ,。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本,，保證其濃度處于試劑盒的檢測范圍內(nèi) 。

• 酶標抗體：即 HRP 標記的抗可溶性白介素 7 受體抗體,，為濃縮液,，使用時需按要求用酶標抗體稀釋液稀釋 。

• 酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體 ,。

• 底物溶液：如 TMB 底物,，可與酶標抗體中的 HRP 發(fā)生反應產(chǎn)生顏色變化 。

• 洗滌液：一般為濃縮液,，使用時需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋,，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合的物質(zhì),，降低背景干擾 ,。

• 終止液：多為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應,，使反應液顏色穩(wěn)定,，便于讀數(shù) 。

• 封板膜：用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板,，防止液體蒸發(fā)和外界污染 ,。

• 使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項,、性能指標等 ,。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜,，1000×g 離心 20 分鐘,，取上清備用。采血應使用無熱原、無內(nèi)毒素的一次性器材 ,。

• 血漿：可用 EDTA,、肝素等抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內(nèi),，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清 。

• 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清 1000×g 離心 20 分鐘,，去除細胞碎片和雜質(zhì)后取上清 ,。

• 組織勻漿：用預冷的 PBS 沖洗組織，去除殘留血液,，剪碎組織后按 1:9（w/v）加入 PBS,，冰上充分研磨。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘,，取上清用于檢測 ,。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測，可 4℃保存,；若長時間保存,，需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復凍融,，溶血樣本一般不適合檢測 ,。

4. 操作流程

• 準備工作：從冰箱取出試劑盒，平衡至室溫（約 30 分鐘）,。稀釋濃縮洗滌液 ,。

• 加樣：設置空白孔、標準品孔和樣本孔,?？瞻卓准訕颖緓i釋液，標準品孔加入不同濃度的標準品,，樣本孔加入處理好的樣本,，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻,，37℃溫育 90 分鐘 ,。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔,，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干,，重復洗滌 5 次,，確保洗凈未結(jié)合物質(zhì) ,。

• 加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 ,。

• 再次洗滌：同上述洗滌步驟 ,。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液,，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（根據(jù)實際顯色情況判斷） ,。

• 終止反應：每孔加入 50μL 終止液,，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi),，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） ,。

• 計算結(jié)果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標,，繪制標準曲線,。根據(jù)樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應的濃度，若樣本進行了稀釋,，需乘以相應的稀釋倍數(shù)得到實際濃度 ,。

5. 性能指標

• 檢測范圍：常見為 31.2 - 2000 pg/mL 等不同區(qū)間，能滿足多種樣本中可溶性白介素 7 受體含量的檢測需求 ,。

• 靈敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低,，能檢測到樣本中微量的該受體 。

• 特異性：對可溶性白介素 7 受體具有高度特異性,，與其他細胞因子受體等物質(zhì)無明顯交叉反應 ,。

• 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%,，保證了檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性 ,。

6. 注意事項

• 嚴格按照說明書操作，不同批次試劑盒試劑不能混用 ,。

• 操作過程中使用一次性吸頭,，避免交叉污染，加樣要準確 ,。

• 洗滌充分是保證結(jié)果準確的關鍵,，洗板不che底易導致假陽性 。

• 底物溶液對光敏感,，需避光保存和使用,，顯色反應要在避光條件下進行 。

• 終止液有腐蝕性,，操作時注意防護,，避免接觸皮膚和眼睛 。

• 建議標準品和樣本均做復孔檢測,，以提高結(jié)果準確性 ,。該試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷 。