人p物質(SP)ELISA分析檢測試劑盒相關實驗研究：

電針足三里穴位對微電泳導人P物質的效應的影響
摘要：據(jù)報導P物質在脊髓背角密集分布于初級傳入末梢處,被認為是傷害性傳入釋放的神經(jīng)遞質之一,為進一步研究電針鎮(zhèn)痛的脊髓機制,觀察了電針‘足三里穴’對微電泳導入P物質效應的影響。 實驗在麻痹而清醒的大鼠進行,在腓腸神經(jīng)電刺激引起大脊髓表面電位的區(qū)域,以多管微電極中心管胞外記錄背角神經(jīng)元的電活動,引出的信號作脈沖計數(shù)直方圖處理并描記,。 
試劑盒的組成： 
（1）結合物及標本的稀釋液,；
（2）洗滌液，在板式ELISA中,，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；
（3）酶標記的抗原或抗體（結合物）；
（4）酶的底物,；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中）,，elisa試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實驗試劑,，不得用于臨床診斷,。
檢測種屬：人、大小鼠,、兔,、羊、猴、豬,、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬,。
標本：血清、血漿,、細胞上清液,、尿液、體液,、灌洗液,、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。 
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人p物質(SP)ELISA分析檢測試劑盒雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清,、血漿,、組織勻漿、細胞裂解液,、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量,。

液體類標本：
包括血清，血漿,，尿液,，胸腹水，腦脊液,，細胞培養(yǎng)上清液等,。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清,，如保存過程中如有沉淀，請再次離心,。
血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA,，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，在離心20分鐘（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清，如保存過程中有沉淀,，請再次離心,。
尿液：
用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,，如保存過程中有沉淀,，請再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，當細胞濃度達到100萬/ml左右,，通過反復凍融,，使細胞破壞并釋放細胞內的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清,，如保存過程中有沉淀，請再次離心,。
組織標本：
切割標本后,，稱取重量，加入一定量的PBS（PH7.4）,，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，標本融化后仍保?-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,，分裝后留一份待檢測,，其余冷凍備用。

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ELISA試劑盒的包被條件與封閉：包被用抗原或抗體的濃度,，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據(jù)試驗的特點和材料的性質而選定?？贵w和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和,?？贵w和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后,，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果,。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協(xié)調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml,。
封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時所用的濃度較低,，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙,，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質的再吸附,。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的,。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點是價廉,，可以高濃度使用（5%）,。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復雜,，而且封閉后的載體不易*保存,，因此在試劑盒的制備中較少應用。 
封閉是否必要,，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件,。并非所有的ELISA固相均需封閉，封閉不當反而會使陰性本底增高,。一般說來,，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結果,。特別是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用,。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的,。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,，在低溫可保存數(shù)月。