人免疫球蛋白輕鏈lambda檢測ELISA試劑盒相關實驗研究：

人免疫球蛋白輕鏈恒區(qū)基因的體外擴增及其在大腸桿菌中的分泌表達
摘要：本文應用聚合酶鏈反應(PCR)技術體外大量擴增人免疫球蛋白輕鏈恒區(qū)基因(人C_k基因),并將該基因克隆至分泌型表達載體pINⅢ-ompA2,轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達,。應用水休克法抽提大腸桿菌的周質(zhì)蛋白,經(jīng)SDS-PAGE電泳,免疫印跡法分析,結(jié)果表明人恒區(qū)基因在大腸桿菌中得到表達,并能分泌至細菌的周質(zhì)空間,。約50％的表達蛋白其ompA信號肽已被切除。  
試劑盒的組成： 
（1）結(jié)合物及標本的稀釋液,；
（2）洗滌液,，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；
（3）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）,；
（4）酶的底物；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中）,，elisa試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）,；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實驗試劑，不得用于臨床診斷,。
檢測種屬：人,、大小鼠、兔,、羊,、猴,、豬,、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
標本：血清,、血漿,、細胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。 
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人免疫球蛋白輕鏈lambda檢測ELISA試劑盒雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清、血漿,、組織勻漿,、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量,。

液體類標本：
包括血清,，血漿，尿液,，胸腹水,，腦脊液，細胞培養(yǎng)上清液等,。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,，如保存過程中如有沉淀,，請再次離心。
血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA,，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清,，如保存過程中有沉淀，請再次離心,。
尿液：
用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,，如保存過程中有沉淀,，請再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，當細胞濃度達到100萬/ml左右,，通過反復凍融,，使細胞破壞并釋放細胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清,，如保存過程中有沉淀,，請再次離心。
組織標本：
切割標本后,，稱取重量,，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，標本融化后仍保?-8℃的溫度,，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清，分裝后留一份待檢測,，其余冷凍備用,。

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ELISA試劑盒的包被條件與封閉：包被用抗原或抗體的濃度,，包被的溫度和時間,，包被液的pH等應根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定?？贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果,。包被的zui適當濃度隨載體和,。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果,。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml,。
封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,，封閉就是讓大量不相關的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。封閉的手續(xù)與包被相類似,。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的,。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,，其zui大的特點是價廉，可以高濃度使用（5%）,。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用,，但由于奶粉的成份復雜，而且封閉后的載體不易*保存,，因此在試劑盒的制備中較少應用,。 
封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件,。并非所有的ELISA固相均需封閉,，封閉不當反而會使陰性本底增高。一般說來,，雙抗體夾心法,，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果,。特別是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用,。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的,。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,，在低溫可保存數(shù)月。