人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA檢測試劑盒相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究：

消化性潰瘍病人幽門螺旋桿菌感染知識調(diào)查及健康宣教策略
摘要：[目的]探討消化性潰瘍病人在接受健康宣教后對幽門螺旋桿菌(HP)感染知識了解情況。[方法]選取120例消化性潰瘍病人,均給予常規(guī)治療與護(hù)理,同時(shí)對病人進(jìn)行健康宣教,觀察宣教前后病人HP感染知識知曉情況及宣教效果,。[結(jié)果]健康宣教后病人對HP概念,、HP傳播途徑、HP與消化性潰瘍關(guān)系,、HP治療方法及復(fù)查時(shí)間等知識知曉率明顯高于宣教前(P<0.05);健康宣教后醫(yī)囑依從率,、復(fù)查時(shí)HP陰性率及潰瘍愈合率明顯高于宣教前(P<0.05)。[結(jié)論]對HP呈陽性的消化性潰瘍病人,對其實(shí)施針對性,、系統(tǒng)性的健康宣教,能有效提高其對HP感染知識的認(rèn)知,提高依從性,促進(jìn)康復(fù),。 
試劑盒的組成： 
（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
（2）洗滌液,，在板式ELISA中,，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）,；
（4）酶的底物,；
（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）,；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實(shí)驗(yàn)試劑,，不得用于臨床診斷。
檢測種屬：人,、大小鼠,、兔、羊,、猴,、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
標(biāo)本：血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。 
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人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA檢測試劑盒雙抗體夾心ELISA法定量測定人血清,、血漿,、組織勻漿、細(xì)胞裂解液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量,。

液體類標(biāo)本：
包括血清，血漿,，尿液,，胸腹水，腦脊液,，細(xì)胞培養(yǎng)上清液等,。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，如保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心,。
血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀,，請?jiān)俅坞x心,。
尿液：
用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清,，如保存過程中有沉淀,，請?jiān)俅坞x心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,，通過反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并釋放細(xì)胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，如保存過程中有沉淀，請?jiān)俅坞x心,。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量,，加入一定量的PBS（PH7.4）,，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后仍保持2-8℃的溫度,，加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，分裝后留一份待檢測，其余冷凍備用,。

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ELISA試劑盒的包被條件與封閉：包被用抗原或抗體的濃度,，包被的溫度和時(shí)間,，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定,。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果,。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和?？贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,，在4-8℃冰箱中放置過夜,，37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,，每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,?？乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似,。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,，其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉,，可以高濃度使用（5%）。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,，但由于奶粉的成份復(fù)雜,，而且封閉后的載體不易*保存，因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用,。 
封閉是否必要,，取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉,，封閉不當(dāng)反而會使陰性本底增高,。一般說來，雙抗體夾心法,，只要酶標(biāo)記物是高活性的,，操作時(shí)洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),，因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中,，封閉一般是不可少的,。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中，在低溫可保存數(shù)月,。