細胞名稱：人肝癌索拉非尼耐藥株HUH-7/Sorafenib　　  

貨號：WS162（（HUH-7）STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

用途：僅供科研使用

一,、細胞介紹

該細胞為由HUH-7細胞構建的耐索拉非尼藥物細胞株,。

二,、細胞特性

1） 來源：肝癌組織

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼璧生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

三,、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1）詳見說明書,。

  血清我們推薦 FBS500-WP-002

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配,。

四,、 細胞處理

1） 凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖,，即可提高藥物濃度至0.5ug/mL繼續(xù)培養(yǎng),；若此過程中細胞停止增殖,，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約8×105個/mL,，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的藥物濃度,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數板計數,，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱,、代數,、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中,，不可添加藥物,。

2. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。