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北京索萊寶科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè),。
總部位于北京，并在全國(guó)設(shè)有經(jīng)銷(xiāo)或代理機(jī)構(gòu),。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務(wù)確立了“Solarbio”良好的品牌形象,。公司秉承“以客戶(hù)為中心、以產(chǎn)品為保障,、以誠(chéng)信為基礎(chǔ),、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有專(zhuān)業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測(cè)團(tuán)隊(duì)以及*的倉(cāng)儲(chǔ)和物流系統(tǒng),。“Solarbio”已經(jīng)得到全國(guó)科研工作者的認(rèn)可,，成為廣大經(jīng)銷(xiāo)商推崇的。
公司擁有一批專(zhuān)業(yè)的研發(fā)人員,，我們專(zhuān)注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新,。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠,。先后開(kāi)發(fā)了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué),、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的多種試劑及試劑盒,。同時(shí)，索萊寶公司提供各種常規(guī)生化試劑,，庫(kù)存常備產(chǎn)品多達(dá)10000多種,，可隨時(shí)為廣大科研工作者提供各類(lèi)專(zhuān)業(yè)試劑。在質(zhì)量方面,，索萊寶謹(jǐn)記公司信念：質(zhì)量高于一切,。所有研發(fā)的產(chǎn)品都設(shè)有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳a(chǎn)流程,，科學(xué)的質(zhì)量檢測(cè)方法和成熟的質(zhì)量檢測(cè)程序，我們恪守對(duì)每一位用戶(hù)的承諾：用專(zhuān)業(yè)的態(tài)度做專(zhuān)業(yè)的品牌,。同時(shí),，公司組建了一支專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù)隊(duì)伍，能夠?yàn)榭蒲泄ぷ髡咛峁?zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù),。每一位購(gòu)買(mǎi)索萊寶產(chǎn)品的用戶(hù)都能夠得到專(zhuān)業(yè)的咨詢(xún)和完善的售后服務(wù),。
索萊寶公司堅(jiān)持與接軌，注重和*企業(yè)的合作與交流,，并提供產(chǎn)品代理,、市場(chǎng)咨詢(xún)等多項(xiàng)服務(wù)。公司將一如既往與世界更多合作,，不斷為廣大生物科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),。公司理念：“為科研服務(wù)，為生命盡責(zé)”,。一個(gè)人能夠走多遠(yuǎn),，取決于與誰(shuí)同行。索萊寶公司期待與各同行精誠(chéng)合作,。
索萊寶誠(chéng)招生物試劑研發(fā)人員,，期待與廣大同行精誠(chéng)合作，為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,，高效的物流以及專(zhuān)業(yè)的售后服務(wù),。索萊寶感謝所有朋友的支持與幫助，您的支持是我們前進(jìn)的動(dòng)力和保障,。讓我們攜手同行,，共同創(chuàng)造美好的明天。
2016年索萊寶獲得*認(rèn)證,。
生化試劑,，分子生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑,，細(xì)胞培養(yǎng)試劑及耗材
PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量檢測(cè)試劑盒 *2000次*
試劑組成：
產(chǎn)品名稱(chēng)：PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量檢測(cè)試劑盒 *2000次*
種類(lèi)：試劑盒
供應(yīng)商：北京索萊寶
試劑 | 體積 | 組 分 | 保存條件 | 保存期 |
Component A： PicoGreen 試劑 |
1ml 200× in DMSO |
Solution in DMSO | 4 ºC 避光 |
半年 |
Component B： TE
|
50mL |
|
室溫保存 | |
Component c：1ml 小牛胸腺DNA |
1 mL |
1ug/ml in TE Buffer |
4 ºC 保存 |
PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量檢測(cè)試劑盒 *2000次*
操作步驟：
1,、試劑制備
PicaGreen dsDNA （Component A ）(定量試劑是以1mL 的濃縮液形式保存在無(wú)水的DMSO（二甲基亞砜）中。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天,，配制2XPicoGreen 試劑的操作溶液,，用1xTE（Component B）按1:200 的比例稀釋濃縮液。如果要準(zhǔn)備足夠的操作溶液測(cè)定20 個(gè)樣品,，可在20mL1x TE （Component B）中加入100μLPicaGreen dsDNA（Component A ） 定量試劑,。由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制,。PicaGreen 試劑（Component A ）見(jiàn)光易降解,，所以應(yīng)將配好的溶液用錫箔包住或放置暗處避光保存,。溶液在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證*結(jié)果,。
2,、 DNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.1 預(yù)備1μg/mLdsDNA（ Component c） 或貯存液于1x TE 中。根據(jù)在1cm 光程長(zhǎng)度的比色杯中A260nm 時(shí)的吸光度確定DNA 濃度,；相應(yīng)于1μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02,。盡管任何純化的dsDNA 制劑都可用來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，但常用的是小牛胸腺DNA,。用跟被檢測(cè)的樣品相似的DNA 做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，用或長(zhǎng)或短的線型DNA的 片段測(cè)定相近大小的酶切片段；質(zhì)粒用于測(cè)定質(zhì)粒DNA,。然而大部分線狀dsDNA 分子,，不管其片段長(zhǎng)度大小,，都會(huì)產(chǎn)生大致相等的信號(hào),。PicaGreen 試劑測(cè)定法在通常污染核酸制劑的幾種復(fù)合物存在的條件下仍能保持線狀，盡管信號(hào)強(qiáng)度可能受到影響,。因此,，為了得到有效的對(duì)照處理，被用
來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的dsDNA 溶液要用和實(shí)驗(yàn)樣品相同的方式來(lái)處理,，并且應(yīng)該包含相同的可能存在的污染物,。
2.2 要產(chǎn)生從0.5ng/mL 到500ng/mL（見(jiàn)表1）單重復(fù)8 個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在2X 終濃度下配制一系列的DNA 溶液,，混合相同體積的2XDNA 和2XPicaGreen 操作溶液,，放入10×10mm 比色杯中?；旌舷嗤w積的1XTE 和2XPicaGreen 操作溶液以備空白對(duì)照,。避光于室溫下放置2-5 分鐘。
2XDNA 溶液濃度 （ng/mL） | 2XDNA 溶液的體積 （mL） | 2XPicaGreen 溶液的 體積（mL） | PicaGreen 試劑測(cè)定中DNA 的終濃度(ng/mL) |
1000 | 1 | 1 | 500 |
200 | 1 | 1 | 100 |
50 | 1 | 1 | 25 |
20 | 1 | 1 | 10 |
5 | 1 | 1 | 2.5 |
2 | 1 | 1 | 1 |
1 | 1 | 1 | 0.5 |
0 | 1 | 1 | 空白 |
表1 用10×10mm 比色杯時(shí)DNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.3 當(dāng)用微量檢測(cè)皿適配器時(shí),，PicaGreen 測(cè)定也可在較低的測(cè)定體積（50μL 到200μL）內(nèi)完成,。欲產(chǎn)生從1ng/mL 到100ng/mL（見(jiàn)表2）的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在2X 終濃度下配制一系列的DNA 溶液,，混合相同體積的2XDNA 和2XPicaGreen 操作溶液,，將至少50μL 溶液轉(zhuǎn)移到微量檢測(cè)皿中。確信不要在樣品中引入氣泡,，輕輕地彈微量檢測(cè)皿的外部經(jīng)?？梢则?qū)散氣泡。避光于室溫下放置2-5 分鐘,。
2X DNA 溶液濃度 （ng/mL） | 2X DNA 溶液的體積 （uL） | 2X PicaGreen 溶液的體積（uL） | PicaGreen 試劑測(cè)定中DNA 的終濃度(ng/mL) |
200 | 30 | 30 | 100 |
50 | 30 | 30 | 25 |
20 | 30 | 30 | 10 |
5 | 30 | 30 | 2.5 |
2 | 30 | 30 | 1 |
0 | 30 | 30 | 空白 |
表2 用微量檢測(cè)皿時(shí)DNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.4孵育后用合適的熒光計(jì)測(cè)量樣品熒光值,。選擇藍(lán)色激發(fā)光,，用熒光值z(mì)ui大的樣品校正儀
器。
2.5 測(cè)量剩余樣品的熒光值,。不同的微型熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù),，數(shù)據(jù)可以用來(lái)產(chǎn)生DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，下面以TBS-380 微型熒光計(jì)為例,。
圖1 PicaGreen 標(biāo)準(zhǔn)曲線
3,、樣品分析
3.1 用1X TE 稀釋未知DNA 樣品至需要的體積（10×10mm 比色杯需1.0mL，微量檢測(cè)皿需25-100μL）,。對(duì)樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被zui大限度地沖淡,。然而，也要避免取樣體積太小而無(wú)法精確吸取的情況,。去除樣品中RNA 和ssDNA 參照4 部分,。
3.2 在每個(gè)樣品中加入2XPicaGreen 試劑的操作溶液（3.1 節(jié)準(zhǔn)備），混合好,，將混合物移入合適的比色杯,，避光于室溫下放置2-5 分鐘。
3.3 可以對(duì)樣品進(jìn)行不同的稀釋處理重復(fù)測(cè)定以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
4 去除樣品中單鏈核苷酸
當(dāng)ssDNA 與dsDNA 等摩爾濃度時(shí),，后者的測(cè)定受前者的干擾很小。前者濃度10 倍于后者時(shí),，,。對(duì)熒光信號(hào)的干擾也不過(guò)10%。但當(dāng)DNA 濃度低時(shí),，ssDNA 能產(chǎn)生較大干擾在高濃度時(shí),，由RNA 結(jié)合PicaGreen 試劑產(chǎn)生的熒光值用RNA酶處理樣品可消除。RNA 酶A,、酶T1 結(jié)合核酸酶S1 能除去所有單鏈核酸,，從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產(chǎn)生。（具體做法請(qǐng)查閱相關(guān)的參考文獻(xiàn)）
參考文獻(xiàn)：
[1] Nucleic Acids Res. 24, 2623 (1996)
[2] BioTechniques 21, 372 (1996)
[3] BioTechniques 21, 664 (1996)
[4] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 6091 (1996)
[5] Anal. Biochem. 102, 344 (1980)
[6] Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch and
T. Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989)
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