真菌基因組DNA提取試劑盒說明書|貨號：D2300

生產(chǎn)廠家：北京索萊寶

貨號：D2300

規(guī)格：50T/ 100T

保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存,，復(fù)檢期12個月,，2℃-8℃保存時間更長。

真菌基因組DNA提取試劑盒內(nèi)容：

RNase A,、蛋白酶K,、玻璃珠、溶液A,、溶液B,、漂洗液、洗脫液,、吸附柱,、收集管、說明書

真菌基因組DNA提取試劑盒說明： 真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,，已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,，種超過10萬個。真菌通常又分為三類,，即酵母菌,、霉菌和蕈菌（大型真菌）。對于酵母菌和霉菌,，可以用玻璃珠處理,，而對于大型真菌，可直接用液氮研磨,。經(jīng)過前期處理的菌液,，用硅質(zhì)膜吸附，即可得到高純度的基因組,。提取純化后的DNA,，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing,，Southern blot,，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn),。

真菌基因組DNA提取試劑盒操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心,。

1,、 樣品的處理： 1）對于酵母菌，取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,，離心收集,，棄上清。加入200ul 溶液A,，加入20ul RNase A,，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩,，約5-10min,。 2）霉菌(孢子也可相同處理)：取50-100mg菌絲，加200ul溶液A,，用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠,，在高速振蕩器上振蕩,，約30min,。 3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取50-100mg樣品，倒入適量的液氮,，立即研磨重復(fù)3 次,，使樣品研成粉末（如無液氮，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨）,，加200ul溶液A,，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠,，在高速振蕩器上振蕩,，約5min。

2,、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,，充分混勻，55℃水浴消化,，30min,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，12000rpm離心2min,。將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中,。如有沉淀,，可再次離心,。

3、在上清中加入200ul溶液B,，充分混勻,。如出現(xiàn)白色沉淀，可放55℃水浴5min,，沉淀即會消失,，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,，說明樣品消化不*,，可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,，請?jiān)黾酉瘯r間,。

4、再加入200ul無水乙醇,，充分混勻,，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取,，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,，放置2分鐘,。

5、12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

6,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7,、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。 8,、12000rpm離心2min,，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切,、PCR等。

9,、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min,，12000rpm離心1min,。

10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，室溫放置2min,，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA,。

真菌基因組DNA提取試劑盒注意事項(xiàng)：

1.       由于真菌種類萬千,，對于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨,，再用玻璃珠振蕩,，蛋白酶K處理，一般都可以得到一定量的基因組DNA,，如電泳檢測很弱,，一般PCR都會有較好結(jié)果。

2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,，可在55℃水浴中重新溶解,。

3. 如果DNA提取量很少,，可加長玻璃珠處理時間，如果提取DNA成彌散短條帶,，可減少玻璃珠處理時間,。

4. 洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率,；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防DNA降解。

5. DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA的片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān),。回收得到的DNA的片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度,。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA,。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會偏低,，因?yàn)?/span>pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低,。 6. 在確保樣品無誤的情況下,，如經(jīng)過多次試驗(yàn),，都無法提出DNA,，請將部分樣品寄至我公司，我們代為摸索優(yōu)化條件,，以使您的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘＿M(jìn)行下去,。

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