真菌基因組DNA提取試劑盒說明書|貨號：D2300

生產廠家：北京索萊寶

貨號：D2300

規(guī)格：50T/ 100T

保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存,，復檢期12個月，2℃-8℃保存時間更長,。

真菌基因組DNA提取試劑盒內容：

RNase A,、蛋白酶K、玻璃珠,、溶液A,、溶液B、漂洗液,、洗脫液,、吸附柱、收集管,、說明書

真菌基因組DNA提取試劑盒說明： 真菌是具有真核和細胞壁的異養(yǎng)生物,。種屬很多，已報道的屬達1萬以上,，種超過10萬個,。真菌通常又分為三類，即酵母菌,、霉菌和蕈菌（大型真菌）,。對于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理,，而對于大型真菌,，可直接用液氮研磨。經過前期處理的菌液,，用硅質膜吸附,，即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,，可以直接用于 PCR/Real time-PCR,，sequencing，Southern blot,，mutant analysis,，SNP 等下游應用實驗,。

真菌基因組DNA提取試劑盒操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽,。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。

1、 樣品的處理： 1）對于酵母菌,，取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,，離心收集，棄上清,。加入200ul 溶液A,，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠,，在高速振蕩器上振蕩,，約5-10min。 2）霉菌(孢子也可相同處理)：取50-100mg菌絲,，加200ul溶液A,，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲，加入20ul RNase A,，再加入100mg玻璃珠,，在高速振蕩器上振蕩，約30min,。 3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取50-100mg樣品,，倒入適量的液氮，立即研磨重復3 次,，使樣品研成粉末（如無液氮,，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當研磨），加200ul溶液A,，加入20ul RNase A,，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩,，約5min,。

2、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,，充分混勻,，55℃水浴消化，30min,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，12000rpm離心2min。將上清轉移到一個新的離心管中,。如有沉淀,，可再次離心,。

3、在上清中加入200ul溶液B,，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,，可放55℃水浴5min,，沉淀即會消失，不影響后續(xù)實驗,。如溶液未變清亮,，說明樣品消化不*，可能導致提取的DNA量少及不純,，還有可能導致上柱后堵柱子,，請增加消化時間。

4,、再加入200ul無水乙醇,，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響DNA的提取,，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置2分鐘,。

5,、12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

7,、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。 8,、12000rpm離心2min,，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR等,。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,，室溫放置5min，12000rpm離心1min,。

10,、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min,，12000rpm離心2min,，即可得到高質量的基因組DNA。

真菌基因組DNA提取試劑盒注意事項：

1.       由于真菌種類萬千,，對于一些特別難處理的真菌,，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩,，蛋白酶K處理,，一般都可以得到一定量的基因組DNA，如電泳檢測很弱,，一般PCR都會有較好結果,。

2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在55℃水浴中重新溶解,。

3. 如果DNA提取量很少,，可加長玻璃珠處理時間，如果提取DNA成彌散短條帶,，可減少玻璃珠處理時間,。

4. 洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率,；DNA產物應保存在-20℃,，以防DNA降解。

5. DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA的片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關,。回收得到的DNA的片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA應在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA,。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響光吸收值,，但并不表示純度低。 6. 在確保樣品無誤的情況下,，如經過多次試驗,，都無法提出DNA，請將部分樣品寄至我公司,，我們代為摸索優(yōu)化條件，以使您的實驗能夠正常進行下去,。

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