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細(xì)胞固定的幾種方法

來(lái)源:北京索萊寶科技有限公司   2013年05月23日 14:28  

 固定液選擇的標(biāo)準(zhǔn):

1)好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),;

2)大限度地保存抗原的免疫活性,。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中是禁用的;

3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑,,如帶有苦味酸的固定劑,,還有甲醛升汞固定液,會(huì)使上皮細(xì)胞產(chǎn)生非特異性熒光,;

4)固定劑的選擇,、固定時(shí)間、溫度和PH值都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

 

常用的幾種固定液:

14%中性甲醛固定液:能滿足常規(guī)HE及免疫組化,、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,,其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液,。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月,。

甲醛(40% 100ml

無(wú)水磷酸氫二鈉 6.5g

磷酸二氫鈉 4.0g

蒸餾水 900ml

2)乙醇固定液:使用時(shí)以80%-95%的濃度為宜,,具有硬化、固定,、脫水等作用,,對(duì)組織滲透力較弱,因此很少單獨(dú)使用,,但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛,,故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查,假如用于證實(shí)尿酸結(jié)晶和保存糖原,,可用于100%乙醇固定組織。

34%多聚甲醛固定液:主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定,。

 

混合固定液

1)乙醇-甲醛(乙醇-福爾馬林,,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定,。該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水,。

甲醛(40% 100ml

95%乙醇 900ml

2B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織,。染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。

無(wú)水醋酸鈉 1.25g

升汞 6.0g

蒸餾水 90ml

使用前加入甲醛 10ml

3Bouin固定液:非凡適用于睪丸活檢組織的固定,。Bouin液對(duì)組織固定較均勻,,收縮很少,不會(huì)使組織變硬變脆,。需現(xiàn)配現(xiàn)用,。

飽和苦味酸水溶液(約1.22% 75ml

甲醛 25ml

冰醋酸 5ml

4Carnoy固定液:穿透能力強(qiáng),可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,,非凡適用于固定外膜致密的組織,,也適用于糖原及尼氏小體的固定。

5 Zenker固定液:經(jīng)此液固定的標(biāo)本,,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清楚,,但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽(yáng)光,,以免引起化學(xué)變化而失效,。

 

北京索萊寶科技有限公司 

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