動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒/D1700/北京索萊寶
生產廠家:北京索萊寶
貨號:D1700
產品名稱:動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒
庫存:現貨
動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒內容:RNase A\蛋白酶K\溶液A\溶液B\漂洗液\洗脫液\吸附柱\收集管\說明書
動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒說明:
本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統,,提取組織和細胞的基因組DNA,。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料,能夠高效,、專一吸附DNA,,可大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,,純度高,,質量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,,包括酶切,、 PCR、文庫構建,、Southern雜交等實驗,。
動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入休積請參照瓶體上的標簽,。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。
1、樣品的處理:
a,、細胞:取1×106-1×107個懸浮培養(yǎng)細胞,,12000rpm離心1min收集細胞,貼壁細胞先用胰蛋白酶消化處理,,再用預冷的PBS吹打成細胞懸液,,然后12000rpm離心1min收集細胞,盡量除去上清,,加200ul溶液A,,振蕩至*混勻。
b,、組織:組織量不宜過大,,一般不要超過25mg,,可以使用勻漿器勻漿,好用液氮研磨成粉末狀,,再用預冷的PBS或無菌水充分懸浮,,然后12000rpm離心1min收集細胞,盡量除去上清,,加200ul溶液A,,振蕩至*混勻。
2,、向懸浮液中加入20ul (10mg/ml) 的RNase A,,55℃放置15min。
3,、加入20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K,,充分顛倒混勻,55℃水浴消化,,細胞消化時間較短,,組織消化時間較長,一般需要1-3個小時才能完成(鼠尾需要消化隔夜),。消化期間可顛倒離心管混勻數次,,直至樣品消化*為止。消化*的指標是:液體清亮及粘稠,。
4,、加入200ul體積溶液B,充分顛倒混勻,,如出現白色沉淀,,可放置于75℃ 15-30min,沉淀即會消失,,不影
響后續(xù)實驗,。如溶液未變清亮,說明樣品消化不*,,可能導致提取的DNA量少及不純,,還有可能導致堵塞吸附柱。
5,、加入200ul無水乙醇,,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,。
6,、12000rpm離心1min,,棄廢液,,將吸附柱放入收集管中。
7,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm離心1min,,棄廢液,,將吸附柱放入收集管中。
8,、向吸附柱中加入500ul漂洗液,,12000rpm離心1min,棄廢液,,將吸附柱放入收集管中,。
9、12000rpm離心2min,,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR等,。
10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,,向吸附膜*懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,,室溫放置5min,12000rpm離心2min,。
11,、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,,即可得到高質量的基因組DNA,。
動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒注意事項:
1、試劑盒拆封后,,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存,。
2、樣品應避免反復凍融,,否則會導致提取的DNA的片段較小且提取量也下降,。
3、如果試劑盒中的溶液出現沉淀,,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,,不影響效果。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,,體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率,。
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動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒/D1700/北京索萊寶
科研領域動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒
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