動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒/D1700/北京索萊寶

生產(chǎn)廠家：北京索萊寶

貨號(hào)：D1700

產(chǎn)品名稱：動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒

庫存：現(xiàn)貨

動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒內(nèi)容:RNase A\蛋白酶K\溶液A\溶液B\漂洗液\洗脫液\吸附柱\收集管\說明書

動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒說明:

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取組織和細(xì)胞的基因組DNA,。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,，能夠高效、專一吸附DNA,，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物,。提取的基因組DNA片段大，純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠,。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切,、 PCR,、文庫構(gòu)建,、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒操作步驟：

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入休積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽,。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

1,、樣品的處理：

a,、細(xì)胞：取1×106-1×107個(gè)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，12000rpm離心1min收集細(xì)胞,，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處理,，再用預(yù)冷的PBS吹打成細(xì)胞懸液，然后12000rpm離心1min收集細(xì)胞,，盡量除去上清,，加200ul溶液A，振蕩至*混勻,。

b,、組織：組織量不宜過大，一般不要超過25mg,，可以使用勻漿器勻漿,，好用液氮研磨成粉末狀，再用預(yù)冷的PBS或無菌水充分懸浮,，然后12000rpm離心1min收集細(xì)胞,，盡量除去上清，加200ul溶液A,，振蕩至*混勻,。

2、向懸浮液中加入20ul (10mg/ml) 的RNase A,，55℃放置15min,。

3、加入20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K,，充分顛倒混勻,，55℃水浴消化，細(xì)胞消化時(shí)間較短,，組織消化時(shí)間較長(zhǎng),，一般需要1-3個(gè)小時(shí)才能完成（鼠尾需要消化隔夜）,。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,，直至樣品消化*為止。消化*的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠,。

4,、加入200ul體積溶液B,，充分顛倒混勻,，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于75℃ 15-30min,，沉淀即會(huì)消失,，不影

響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,，說明樣品消化不*,，可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞吸附柱,。

5,、加入200ul無水乙醇，充分混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,。

6,、12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

7,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),， 12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。

8、向吸附柱中加入500ul漂洗液,，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

9,、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等,。

10,、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,，室溫放置5min,，12000rpm離心2min,。

11、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，12000rpm離心2min,，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒注意事項(xiàng):

1,、試劑盒拆封后,，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2,、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA的片段較小且提取量也下降。

3,、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果,。

4,、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會(huì)影響回收效率:洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。

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科研領(lǐng)域動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒

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