按標記物質的種類,，如熒光染料,、放射性同位素,、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶),、鐵蛋白,、膠體金等,，可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、酶標法和免疫金銀法等,。按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步,、三步或多步法),；按結合方式可分為抗原—抗體結合,，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接,，如卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結（SP）法等,，其中免疫組化SP法是常使用的方法,。

一般的免疫組化sp法的實驗步驟具體如下：

1,、烤片,，68℃,，20分鐘,

2,、常規(guī)二甲苯脫蠟,，梯度酒精脫水,；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min

3,、阻斷 滅活內源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,，PBS沖洗3X5min；

4,、抗原修復:置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃,，15－20min）,，自然冷卻20min 以上,，再用冷水沖洗缸子,，加快冷卻至室溫,，PBS沖洗3X5min。

5,、正常羊血清工作液封閉，37℃10 min,，傾去勿洗.

6,、滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）,；

滴加生物素標記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

7,、滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

8,、DAB/ H2O2反應染色,，自來水充分沖洗后,，蘇木素復染,，常規(guī)脫水,，透明，干燥,，封片。

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