培養(yǎng)基配方

常用培養(yǎng)基

（1）血液瓊脂（血平板）：

   【配方一】    

   成分：普通營養(yǎng)瓊脂90rot,；脫纖維羊血(或兔血)10ml,。

   制法：將已滅菌的普通營養(yǎng)瓊脂(pH7.6>加熱融化；冷卻至50℃左右,，以無菌手續(xù)加入10ml脫纖維羊血（臨用前置37℃水浴箱預(yù)溫）,，輕輕搖勻（勿使有氣泡），傾注于滅菌平皿內(nèi)，每一平皿(直徑9 cm)13～15ml或分裝試管,，制成斜面,；待凝固后，抽樣置37℃培養(yǎng)18～24h,，觀察有無細(xì)菌生長,；如無菌生長，置4℃?zhèn)溆谩?/span>

   【配方二】

   成分：肉膏湯(pH7.8)800ml,；硫酸鎂(493g/L)8 ml,；脫纖維羊血80ml；瓊脂21～23g,；5.0g/L對氨基ben甲酸8ml,。

   制法：將肉膏湯置三角燒瓶內(nèi)，加入硫酸鎂,、對氨基ben甲酸及瓊脂,，混合并使液體浸濕瓊脂，121.3℃高壓滅菌30分鐘,，取出冷至50℃左右,，以無菌手續(xù)加入37℃水浴預(yù)溫的無菌脫纖維羊血或兔血，輕輕搖勻,，傾注平板,，凝固后，抽樣置37℃培養(yǎng)18～24h,，如無菌生長冷藏備用,。

（2）巧克力色血瓊脂（巧克力平板）：

   成分：與血瓊脂配方相同。

   制法：與血瓊脂相同,，但于培養(yǎng)基中加入血液混勻后,，須再置85℃水浴10～15分鐘，使血液的顏色由鮮紅轉(zhuǎn)變?yōu)榍煽肆ι?；取出并冷?/span>50℃左右,，傾注平板，經(jīng)無菌試驗后存4℃?zhèn)溆谩?/span>

（3）麥康凱瓊脂：分離腸道桿菌用,。

   成分：蛋白胨20g,；乳糖10g；10g/L的中性紅水溶液5ml,；氯化鈉5g,；瓊脂20一25g；膽鹽5g（或牛膽酸鈉4g與去氧膽酸鈉1g）,，加蒸餾水1000ml,。

   制法：將蛋白胨,、氯化鈉、膽鹽及乳糖加于500ml蒸餾水中加熱溶解,；將瓊脂加于余下的500ml蒸餾水中加熱溶解,；將上述兩液趁熱混合，調(diào)整pH至7.4,，以絨布過濾,，按每瓶100ml分裝，115.6℃高壓滅菌20分鐘,，待冷卻至50～60℃時,，每100ml培養(yǎng)基中加入經(jīng)煮沸滅菌的10g/L中性紅溶液0.5ml，混合后傾注平板,。

  注意事項：膽鹽能抑制部分非病原菌及革蘭氏陽性細(xì)菌的生長，但能促進(jìn)某些革蘭氏陰性病原菌的生長,；因含有乳糖及中性紅指示劑,，故分解乳糖的細(xì)菌（如大腸桿菌），菌落呈紅色,；不分解乳糖的細(xì)菌,，菌落不呈紅色。

（4）伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)：分離腸道桿菌用,。

   成分：肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml,；20g/L的伊紅水溶液(滅菌)2ml；乳糖1g,；6g/L的美藍(lán)水溶液(滅菌)1mI,。

   制法：加熱溶化已滅菌的肉膏湯瓊脂，加入乳糖1g,；待冷至50℃左右,，加入伊紅及美藍(lán)溶液，混勻傾注平板,，凝固后備用,。

（5）羅氏培養(yǎng)基：分離結(jié)核桿菌用。

   成分：磷酸二氫鉀(無水)0.96g,；天門冬酰胺(天門冬素)0.72g,；枸櫞酸鎂0.12g；硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.048g,；純甘油(中性)2.4ml,；蒸餾水120ml；馬鈴薯粉6.0g,，新鮮雞蛋6～8個,；10g/L的孔雀綠溶液8ml。

   制法：將磷酸二氫鉀至純甘油的各成份混合，置沸水中加熱溶解,，加入馬鈴薯粉,，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊,，并繼續(xù)在沸水浴中加熱半小時,，時加攪拌，待冷至65℃時加入全蛋液200ral及10g/L孔雀綠溶液8ml,，充分混勻,，分裝于無菌試管，每管約5～6ml,，塞上橡皮塞,；置血清凝固器內(nèi)經(jīng)90℃1h，制成斜面,。

（6）沙保弱氏培養(yǎng)基：培養(yǎng)真菌用,。

   成分：蛋白胨10g；葡萄糖40g,；瓊脂20g,；蒸餾水1000ml。

   制法：上述成份混合加熱溶解（一般可不校正pH）,，分裝試管,，121.3℃高壓滅菌15分鐘，趁熱制成斜面,。如不加瓊脂即為沙保弱氏液體培養(yǎng)基,。

（7）葡萄糖肉湯：用于增菌。

   成分：酵母浸膏3g,，構(gòu)櫞酸鈉3g,；牛肉湯1000ml；247g/L硫酸鎂20ml,；葡萄糖3g,；磷酸氫二鉀2g；5g/L對氨基ben甲酸5ml,。

   制法：除葡萄糖及硫酸鎂外,，其他各物混和，加熱溶解,，校正pH至7.6,，再煮沸5分鐘，用濾紙過濾并分裝于100ml三角燒瓶中,，每瓶50ml,，包扎瓶口,，121.3℃高壓滅菌15分鐘；將葡萄糖配成100g/L的水溶液,，硫酸鎂配成247g/L的水溶液,，分別高壓滅菌（葡萄糖為113℃）15分鐘，于每50ral,、無菌肉湯內(nèi)加入滅菌葡萄糖及硫酸鎂水溶液各1ml混勻,，于37℃培養(yǎng)48h。證明無菌生長后存于4℃?zhèn)溆谩?/span>

（8）解脲支原體培養(yǎng)基：

 成分：牛肉浸液70ml,；蛋白胨1.0g,；NaCl 0.5g；KH2PO4 0.15g,；4.0g/L酚紅0.5mI,。

 制法：調(diào)pH至6.0，加熱融化后濾紙過濾,，121.3℃高壓滅菌,，無菌加入小牛血清20ral；250g/L鮮酵母浸液10ml,；青霉素20萬單位；400g/L尿素（G3濾器過濾除菌）0.5ml,，分裝試管,，每管4ml。如傾注平板,，將上述液體培養(yǎng)基中加入瓊脂粉1.0g,。

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