現(xiàn)代分子育種
傳統(tǒng)的育種方法周期長,、不定向,、受親緣關(guān)系限制，制約了育種工作的進(jìn)一步發(fā)展?，F(xiàn)代分子育種將分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于育種中,，通常包括：
? 分子標(biāo)記輔助育種(MAS)
?基因工程育種(轉(zhuǎn)基因育種)
(1)分子標(biāo)記輔助育種
利用分子標(biāo)記與決定目標(biāo)性狀基因緊密連鎖的特點(diǎn)，通過檢測分子標(biāo)記,，即可檢測到目的基因的存在,，達(dá)到選擇目標(biāo)性狀的目的，實(shí)現(xiàn)基因聚合,、基因滲入,。通過前景選擇和背景選擇，獲得目標(biāo)基因型純合,、遺傳背景一致,、綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良的品系，具有快速,、準(zhǔn)確,、不受環(huán)境條件干擾的優(yōu)點(diǎn)。
從早期的SSR標(biāo)記到目前的SNP標(biāo)記,，從單一性狀/局部區(qū)域的分子標(biāo)記輔助篩選到多性狀/全基因組選擇,，分子標(biāo)記輔助育種已經(jīng)成為“常規(guī)"，孟山都,、先鋒,、先正達(dá)等跨國公司進(jìn)展迅速。2006年個通過分子標(biāo)記輔助育種產(chǎn)生的品種已經(jīng)由孟山都公司投放市場,。分子標(biāo)記輔助育種可分為樣品采集和前處理,、DNA提取、基因分析三大環(huán)節(jié),，容易忽略的成本是時間和人力,。
分子育種的三個必須：
? 時間必須快
? 通量必須高
? 成本必須低
(2)轉(zhuǎn)基因育種
隨著分子生物學(xué)和植物基因工程的不斷發(fā)展，越來越多的育種工作者開始利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得常規(guī)育種技術(shù)難以得到的新種質(zhì)和新品種,。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的好處在于可以打破自然界物種間原有的生殖隔離,，促進(jìn)基因在不同物種間的交流,，極大地豐富變異類型，增大遺傳多樣性,，為植物新品種的培育提供豐富的育種資源,。
植物轉(zhuǎn)基因操作中，除利用抗生素抗性等選擇基因排除非轉(zhuǎn)化細(xì)胞,、利用Gus和CFP等報告基因顯示轉(zhuǎn)基因成功外,，更重要的是從分子水平鑒別出陽性轉(zhuǎn)化體，明確目的基因在轉(zhuǎn)基因植株中的拷貝數(shù)和轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況,。
(3)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測
據(jù)國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用服務(wù)組織(ISAAA)的數(shù)據(jù),，到2015年全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積已超過1.8億公頃，種植轉(zhuǎn)基因作物的國家達(dá)到29個,。消費(fèi)者對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全日益關(guān)注,，市場提出對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的知情權(quán)和選擇權(quán)等要求。
我國于2001年5月23日頒布的《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》規(guī)定實(shí)施轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理制度,。轉(zhuǎn)基因檢測方法根據(jù)檢測靶標(biāo)的不同可分為對外源基因的檢測和對外源蛋白的檢測,，目前使用的是基于核酸的檢測方法。
(4)種子真實(shí)性和品種純度檢測
國以農(nóng)為本,，農(nóng)以種為先,。一粒種子可以改變世界。現(xiàn)在國內(nèi)優(yōu)良種子產(chǎn)品很多為國外進(jìn)口,，農(nóng)民也愿意高價購買優(yōu)良種子,，有不法商販用普通種子冒充優(yōu)良種子。隨著我國種子市場監(jiān)管力度不斷加大,，種子質(zhì)量顯著提高,。
鑒定種子真實(shí)性和品種純度的方法通常有形態(tài)鑒定法、生物化學(xué)方法,、分子標(biāo)記法等,，其中DNA分子標(biāo)記檢測法具有多態(tài)性豐富、準(zhǔn)確性高,、重復(fù)性好,，無器官發(fā)育時期的特異性，不受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn),。
植物DNA提取的推薦方案
(1)CTAB法
傳統(tǒng)的植物核酸提取方法主要是CTAB法,。CTAB法成本低、得率高,，基本上可以滿足分子育種實(shí)驗(yàn)中絕大部分的實(shí)驗(yàn)研究,，是目前很多實(shí)驗(yàn)室在使用的方法。但該方法需要用到有機(jī)溶劑,，易污染環(huán)境和影響人體健康,，人工操作均一性較差，其操作繁瑣,，需要多次離心,，不易進(jìn)行自動化操作。
(2)KingFisher磁珠法
Thermo Scientific™ KingFisher™技術(shù)(US6447729,US6448092)為創(chuàng)新的無液體轉(zhuǎn)移的磁珠處理方法,，適于快速分離純化DNA/RNA,，蛋白及細(xì)菌富集。純化過程通過特制的磁棒(外包經(jīng)特殊疏水處理的磁套)吸附磁珠在不同反應(yīng)板/管間轉(zhuǎn)移,，特酸,、蛋白、細(xì)菌等目標(biāo)樣品與磁珠免疫結(jié)合,，從而被分離,。整個純化過程直接轉(zhuǎn)移磁株，無液體轉(zhuǎn)移,，在處理過程中不需要分液或吸液,。純化1批樣品(多至96份)只需15-40min(根據(jù)試劑盒程序有所差異)！
KingFisher磁珠法的優(yōu)點(diǎn)：
? 技術(shù),，轉(zhuǎn)移磁珠而非液體,，無有機(jī)溶劑污染，無交叉污染,，產(chǎn)物可直接用于PCR,，測序等下游實(shí)驗(yàn)
? 既適用于1mL的標(biāo)準(zhǔn)工作體積，也適用于5mL的大工作體積
? 無需離心,、過柱,，操作方便快速，同時避免大片段堵塞或小
片段丟失
? 標(biāo)準(zhǔn)化的提取純化流程,，確保實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和結(jié)果
? 專門的BindIt磁珠純化軟件,，用戶可以靈活的優(yōu)化自己的程序
? 純化過程無液體轉(zhuǎn)移，且結(jié)合,、清洗充分,，純化效率高，節(jié)省試劑
? 開放式平臺,，適用于市場上所有的磁珠純化試劑
自動化整合方案
KingFisher Flex可以和液體處理系統(tǒng),、機(jī)械臂等周邊設(shè)備無縫整合，兼容LIMS系統(tǒng),，使提取流程標(biāo)準(zhǔn)化和自動化,，滿足更高通量的實(shí)驗(yàn)需求。
KingFisher機(jī)械臂優(yōu)點(diǎn)：
? 并行處理，工作效率高
? 安全可靠,，可實(shí)現(xiàn)無人值守式工作
? 開放式系統(tǒng),，可升級至更高通量或整合更多的流程
? 試劑開放，確保低的運(yùn)行成本
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