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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員·8年
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賽爾瑞成采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),，提供基因敲除細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)。賽爾瑞成根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)合成sgRNA,，將Cas9和sgRNA基因轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞,，進(jìn)而敲除目的基因,，并進(jìn)行單克隆篩選，獲得基因敲除單克隆細(xì)胞系,。CRISPR/Cas9系統(tǒng)作為新一代基因編輯工具,，因其構(gòu)建方便、設(shè)計(jì)靈活,，操作簡(jiǎn)單,、效率高成本低，成為基因敲除的新一代利器,。該系統(tǒng)由有DNA切割活性Cas9蛋白和識(shí)別特異靶點(diǎn)的sgRNA組成,。Cas9是一種核酸內(nèi)切酶，它和sgRNA構(gòu)成的復(fù)合體能與DNA分子上的特定序列結(jié)合,，并在PAM
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白介素15（IL-15）的作用機(jī)制、生物學(xué)功能及應(yīng)用
白細(xì)胞介素-15（interleukin-15,，IL-15）是一種T細(xì)胞生長(zhǎng)因子,，于1994年被兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)，與IL-2具有類似的生物學(xué)功能,。IL-15主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,。人體多種組織表達(dá)IL-15mRNA,如心、肺,、腎,、尤其是胎盤和肌肉,。細(xì)胞來(lái)源和靶細(xì)胞分布較IL-2廣，故可能在不表達(dá)IL-2的部位發(fā)揮類似IL-2的效應(yīng),。IL-15的作用機(jī)制：IL-15Rα在人和小鼠中廣泛表達(dá),，IL-15信號(hào)通路的主要機(jī)制是IL-15與細(xì)胞上的IL-15Rα亞基結(jié)合后，IL-15停留在細(xì)胞表 -
干貨｜ 細(xì)胞復(fù)蘇/凍存/傳代之實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)
一,、細(xì)胞培養(yǎng)前期準(zhǔn)備工作細(xì)胞培養(yǎng)儀器設(shè)備：◆細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥（即生物安全柜）◆培養(yǎng)箱（通用推薦：濕式二氧化碳培養(yǎng)箱）◆離心機(jī)◆醫(yī)用冰箱（4℃）和冰柜（-20℃）、生物超低溫冰箱（-80℃）,、液氮冷凍罐◆倒置顯微鏡其他用品：細(xì)胞培養(yǎng)容器（培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、多孔板等）,，吸管和移液器,，培養(yǎng)基、血清和試劑注意事項(xiàng)：◆無(wú)菌工作區(qū)域：細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的主要要求是需要維持細(xì)胞培養(yǎng)操作工作區(qū)域處于無(wú)菌狀態(tài),，簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的方式就是使用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥,。◆無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基：商品化試劑和培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制以確保無(wú)菌,，注意操 -
賽爾瑞成星推薦 逆轉(zhuǎn)錄酶（Reverse Transcriptase）
cDNA合成是基因表達(dá)研究的關(guān)鍵步驟,，而逆轉(zhuǎn)錄酶（ReverseTranscriptase）的質(zhì)量和效率是產(chǎn)生穩(wěn)定完整cDNA的保證條件。低效的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)會(huì)降低cDNA產(chǎn)量和質(zhì)量,，從而影響基因表達(dá)研究的靈敏性,，甚至產(chǎn)生假陰性結(jié)果。因此,，選擇高效穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)錄酶（ReverseTranscriptase）至關(guān)重要。賽爾瑞成提供CrgScriptⅠ和CrgScriptⅡ兩種逆轉(zhuǎn)錄酶,，均屬于高效耐熱型逆轉(zhuǎn)錄酶,，有更高的熱穩(wěn)定性。其在50°C時(shí)仍具有更高的熱穩(wěn)定性和更長(zhǎng)的半衰期,，并且RNaseH活性較低,， -
大腸桿菌表達(dá)宿主菌的訂購(gòu)、運(yùn)輸及保存,、以及如何復(fù)蘇,、長(zhǎng)期保存
一、訂購(gòu)賽爾瑞成提供多種大腸桿菌宿主菌,，如需訂購(gòu),，可提供兩種形式的宿主菌供您選擇：穿刺菌和甘油菌,，貨期均是2-3天.穿刺菌制備方式：將菌種搖瓶活化（對(duì)數(shù)期），預(yù)先在1.5ml的EP管中加入半固體瓊脂培養(yǎng)基,，把活化過(guò)的菌種用牙簽穿刺接種于半固體瓊脂培養(yǎng)基中,，37℃培養(yǎng)一個(gè)晚上即可。甘油菌制備方式：將菌種搖瓶活化,，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期,，取適量菌液于小管中，加入終濃度為10%-20%的滅菌甘油,，混勻后即可,，直接置于-80℃保存。二,、運(yùn)輸及保存方式穿刺菌的運(yùn)輸及保存方式：2-8℃運(yùn)輸,，4℃冰箱保存一周。甘油菌的 -
使用無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)
在單克隆抗體的制備過(guò)程中,，及時(shí)凍存原始孔的雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞是十分重要的,。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能發(fā)生細(xì)胞的污染,、細(xì)胞突變,、分泌抗體能力的喪失等等。如果沒有原始細(xì)胞的凍存,，則可能因上述意外而前功盡棄,。因此，雜交瘤細(xì)胞的凍存在單克隆抗體制備過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用,。目前,，雜交瘤細(xì)胞的凍存方法同其他細(xì)胞系的凍存方法是一樣的。傳統(tǒng)雜交瘤細(xì)胞的凍存：傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液的組分：培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,，或90%的血清+10%DMSO傳 -
Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用手冊(cè)
Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用手冊(cè)可申請(qǐng)領(lǐng)取試用裝Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液介紹1.是一種通用型的細(xì)胞凍存液，可用于凍存人和各種動(dòng)物細(xì)胞株,；2.*凍存液配方,，即開即用，方便快捷,；3.非程序降溫,，-80℃低溫冰箱凍存長(zhǎng)達(dá)5年；4.特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,；5.不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全,；6.可孔板（細(xì)胞培養(yǎng)板）凍存,，可用于雜交瘤細(xì)胞的凍存液。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液存儲(chǔ)條件儲(chǔ)存 -
無(wú)血清細(xì)胞凍存液對(duì)比含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法,，其中細(xì)胞凍存液,，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不僅僅是說(shuō)只是用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的保存,，在細(xì)胞的購(gòu)買,、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用,，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要,。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高、滲透壓改變,、脫水,、pH值改變、蛋白變性等,，從而引起細(xì)胞死亡,。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑，在凍存細(xì)胞時(shí)將細(xì)胞懸浮于凍存液中,，可使冰點(diǎn)降低,，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，
