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細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法,其中細胞凍存液,,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,,不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,在細胞的購買,、寄贈,、交換和運送過程中也起著關鍵作用,因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要,。
如果不加任何條件直接凍存細胞,,細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷,、電解質(zhì)升高,、滲透壓改變、脫水,、pH值改變,、蛋白變性等,從而引起細胞死亡,。而細胞凍存液就相當于細胞的保護劑,,在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,,提高細胞膜對水的通透性,,在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞,,可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用,。這樣就使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,在需要時直接復蘇就可恢復細胞活性,。
傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,,血清的含量是10%,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液,。
含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),,后才移至液氮罐中進行長期的儲存,。
(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,,造成細胞大量的死亡,。)
可見,含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題:
1. 凍存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,,此步可省略)
2. 需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),,步驟繁瑣,耗時耗力
3. 含血清,,細胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風險更高
4. 血清批次、品質(zhì)間差異導致凍存液的批次間差異
5. 需液氮凍存,,且不能原位(如孔板)凍存
Cellregen無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分,,含DMSO、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液,。
Cellregen無血清細胞凍存液的凍存方法是:將細胞凍存懸液(凍存管或孔板)直接放置-80℃冰箱長期保存。
可見,,Cellregen無血清細胞凍存液相對于含血清細胞凍存液的優(yōu)勢有:
1. 即用型,,無需現(xiàn)配,直接將細胞懸浮于凍存液中即可
2. 通用型,,適用于凍存各種細胞系,、原代細胞
3. 無需程序降溫,可直接放置-80℃凍存,,操作簡單
4. 不含血清,,大大減少細胞污染
5. 因不含血清,批次間差異小
6. 無需液氮,,-80℃冰箱長期凍存
7. 可培養(yǎng)板整板凍存,,例如雜交瘤細胞凍存時可節(jié)省篩選過程