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Western blot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體
Westernblot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體——衡量WB成功的標(biāo)尺何為內(nèi)參抗體,、何為標(biāo)簽抗體,？一內(nèi)參抗體內(nèi)參即內(nèi)部參照（InternalControl）,，類似于熒光定量實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參基因,，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(HousekeepingProteins)，它們?cè)诓煌M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,，常用它作為檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平變化時(shí)來(lái)做參照物,。2內(nèi)參抗體的選擇：（1）樣本種屬來(lái)源哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin,、β-tubulin,、GAPDH、Lami -
D-熒光素原理D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，尤其是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見(jiàn)下圖）,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi),，之后注入熒光素,，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等,。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（Transferrin,，TRF、Tf）,，負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵,。以三價(jià)鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成,。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中,，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位,，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用,。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性,，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu),，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過(guò)鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu),。免疫球蛋白分為五類,，即免疫球蛋白G（IgG）,、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）,、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）,。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡(jiǎn)介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分,，約占血清中免疫球蛋白總
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qPCR常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案對(duì)于從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)猿來(lái)說(shuō),，RT-qPCR實(shí)驗(yàn)可謂是老生常談了?？此骑L(fēng)平浪靜,，只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作，實(shí)則險(xiǎn)象環(huán)生,，一丁點(diǎn)的出錯(cuò)都有可能讓我們懷疑人生,。即便如此，在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù),、重復(fù),、再重復(fù)。小翊深有體會(huì),，為此嘔心瀝血整理出來(lái)常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題,，并給出了可能的原因和解決方案，希望大家能夠順利度過(guò)RT-qPCR大關(guān),。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中,，大家或多或少會(huì)遇到擴(kuò)增曲線異常
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抗體親和純化系列產(chǎn)品概述ProteinA、ProteinG是常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白,。將ProteinA,、G分別固定在不同的介質(zhì)上，或同時(shí)將ProteinA,、G共價(jià)偶聯(lián)到介質(zhì)表面,，是從腹水、細(xì)胞培養(yǎng)物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具,。ProteinL源于細(xì)菌,，能更廣泛地結(jié)合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(qū)(ScFv)以及Fab片段,。該蛋白只與抗體的kappa鏈結(jié)合而不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn),，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結(jié)合
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Hifair Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR （gDNA digester plus）
Hifair®Ⅲ1stStrandcDNASynthesisSuperMixforqPCR(gDNAdigesterplus)——Yeasen第三代逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液,，高質(zhì)量cDNA的*,！研發(fā)背景RT-qPCR是一個(gè)多步驟連貫實(shí)驗(yàn)，逆轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能通過(guò)后續(xù)qPCR進(jìn)行判定，因此這一過(guò)程的成功與否十分關(guān)鍵,。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，你是否有遇到過(guò)這些問(wèn)題？1.逆轉(zhuǎn)錄效率低導(dǎo)致后續(xù)qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值偏大,？2.RNA具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或GC含量高導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄失?。?.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品組分多,，加樣麻煩誤差還大,？。,。。,。,。。 -
【干貨+試用】一文get核酸片段化酶知識(shí)要點(diǎn)近小翊在后臺(tái)收到一封留言,，說(shuō)建庫(kù)的片段化儀器壞了,，不能做超聲打斷，問(wèn)有沒(méi)有其他核酸打斷的方法推薦,。核酸打斷的方法可以分為機(jī)器法和試劑法,。其中機(jī)器法包含接觸式和非接觸式，接觸式主要包括探頭式和水浴超聲兩大類,，這類方法比較實(shí)惠,，但是直接接觸樣本會(huì)導(dǎo)致樣本損耗和污染，非接觸式主要包括Diagennode和Covaris這兩個(gè)品牌,，這類儀器和耗材的成本太高,，單個(gè)樣本的耗材成本達(dá)20-50元。試劑法指的是采用片段化酶對(duì)核酸進(jìn)行打斷,，這類方法成本較低,，操作簡(jiǎn)便省時(shí)
