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抗體親和純化系列
產(chǎn)品概述
Protein A,、Protein G是常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白,。將Protein A,、G分別固定在不同的介質(zhì)上,，或同時(shí)將Protein A,、G共價(jià)偶聯(lián)到介質(zhì)表面,，是從腹水、細(xì)胞培養(yǎng)物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具,。
Protein L源于細(xì)菌,，能更廣泛地結(jié)合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(qū)(ScFv)以及Fab片段,。該蛋白只與抗體的kappa鏈結(jié)合而不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn),，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結(jié)合各種來源及亞類的抗體,。
Yeasen生物提供一系列以蛋白A,、蛋白G與蛋白L為核心的抗體純化工具,，涵蓋不同類型填料樹脂及自動(dòng)層析預(yù)裝柱,，方便使用手動(dòng)或自動(dòng)化方式純化抗體蛋白質(zhì)。
Protein A,、G,、L的差異分析
Protein A | Protein G | Protein A/G | Protein L | |
優(yōu)點(diǎn) | 高流量； 結(jié)合能力強(qiáng),； 與IgG的Fc和Fab和F（ab’）2片段結(jié)合 | 比Protein A有結(jié)合范圍更廣泛 | 結(jié)合范圍更廣,； 結(jié)合能力更強(qiáng)； 實(shí)用性更高 | 不僅可以結(jié)合所有的Ig類(IgG,，IgM,，IgA,，IgE和IgD)； 還可以結(jié)合單個(gè)輕鏈（Scfv）和Fab片段 |
缺點(diǎn) | 宿主細(xì)胞蛋白的一些非特異性結(jié)合 | 不能像蛋白A一樣耐受苛刻的洗脫條件 | 不結(jié)合牛,、山羊或綿羊來源的免疫球蛋白 |
附表1是關(guān)于蛋白A和蛋白G對于不同的免疫球蛋白相對結(jié)合力的比較,，可用于預(yù)測蛋白A或蛋白G作為親和介質(zhì)時(shí)的選用指導(dǎo)。對于來自特別物種IgG的///佳結(jié)合條件,，應(yīng)該查閱近期的文獻(xiàn),，獲得有價(jià)值的信息。
純化原理
親和純化是一種具有可逆反應(yīng)的生化分離純化技術(shù),，如抗原與抗體,。適用于從成分復(fù)雜且雜質(zhì)含量遠(yuǎn)大于目標(biāo)物的混合物中提純目標(biāo)物。如圖1所示,，首先填料與介質(zhì)偶聯(lián),，結(jié)合形成具有特異親和性的分離介質(zhì)，再向柱子中注入樣本,，配體選擇性的吸附目標(biāo)物質(zhì),，平衡液洗雜，終用洗脫液將目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行洗脫,。
圖1 親和層析示意圖
產(chǎn)品性能
將蛋白樣本Protein A和Protein G純化IgG,，IgG片段和亞類的基礎(chǔ)是二者對IgG-類型的多克隆抗體和單克隆抗體具有很高的特異性親和力。
圖2 Protein A,、G親和性
純化指南
Yeasen生物抗體純化類工具,，以基因改造后的Protein A/G、Protein L為原料,，通過不同化學(xué)方法將其定向,、的偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上，不僅降低了蛋白的非特異性結(jié)合,、實(shí)現(xiàn)了樹脂較高的抗體載量,，同時(shí)也獲得了適用于不同純化要求的抗體純化產(chǎn)品。
產(chǎn)品系列 | 普通型純化樹脂系列 | 快速型純化樹脂系列 | 預(yù)裝柱系列 |
Protein A,、G ,、A/G、L Agarose | Protein A,、G ,、A/G、L 4FF Agarose | Protein A,、G,、L 4FF Chromatography Column | |
平均粒徑d50V | 45-165µm | 90µm | 90µm |
配基 | 重組蛋白 | 重組耐堿蛋白 | 重組耐堿蛋白 |
載量 | Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L > 15mg人IgG/mL | Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/Ml Protein L > 15mg人IgG/mL | Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L > 30mg人IgG/mL |
大操作壓力 | 0.1MPa,1bar | 0.3MPa,3bar | 0.3MPa,3bar |
支撐物 | 4%瓊脂糖微球 | 高度交聯(lián)4%瓊脂糖微球 | 高度交聯(lián)4%瓊脂糖微球 |
優(yōu)勢 | 非特異性結(jié)合低，高載量 | 非特異性結(jié)合極低，高載量高流速,，強(qiáng)穩(wěn)定性 | 柱效穩(wěn)定,，高載量，高流速,，強(qiáng)穩(wěn)定性,，標(biāo)準(zhǔn)接口適配商品化各類中壓色譜系統(tǒng) |
推薦應(yīng)用 | 任意規(guī)模抗體純化 | 任意規(guī)?？贵w純化,，IP | 小規(guī)模抗體純化 |
純化實(shí)例
使用Protein A 1mL預(yù)裝柱純化鼠單抗IgG1,，純化效率高于95%,。
圖3 Protein A純化結(jié)果示意圖
FAQ
常見問題 | 原因分析 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過高 | 篩板堵塞 | 清洗或更換篩板 |
填料堵塞 | 參照說明書樹脂清洗 | |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上柱前使用濾膜 (0.22或0.45μm)過濾,，或者離心去除 | ||
樣品純化過程中曲線不穩(wěn)定 | 樣品或Buffer中含氣泡 | 去除樣品或柱子中的氣泡 |
樣品和buffer進(jìn)行脫氣 | ||
洗脫組分中沒有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 適當(dāng)提,、高抗體濃度 |
抗體被降解 | 蛋白洗脫后應(yīng)立即中和，適當(dāng)提高洗脫液pH | |
樣本與純化介質(zhì)柱不匹配 | 參照表1選擇合適的純化介質(zhì) | |
電泳loading buffer DTT失效 | 使用新鮮配制loading buffer | |
洗脫緩沖液pH不對 | 依次用pH3.0, pH 2.5, pH 2.0洗脫,，電泳檢測產(chǎn)物 | |
結(jié)合緩沖液pH不對 | 應(yīng)保證樣本和結(jié)合緩沖液pH在7.0 | |
回收率逐漸降低 | 上樣量過多 | 減少上樣量 |
柱子太臟,，載量降低 | 參照說明書進(jìn)行樹脂清洗 | |
樣本中脂蛋白、酚紅,、小分子污染物等的去除 | 每毫升樣品中加入0.04mL硫酸右旋葡糖酐和1mL 1M CaCl2沉淀脂蛋白,，離心除去 | |
PVP加入樣品中至終濃度為3%沉淀b-脂蛋白和球蛋白，離心去除 | ||
結(jié)合緩沖液稀釋樣本 | ||
脫鹽柱除去酚紅 | ||
分級(jí)沉淀法去除低分子污染物,，可采用硫酸銨沉淀,，羊脂酸沉淀等方法 | ||
抗體藥物純化過程中，降低聚集體含量 | 在上游細(xì)胞培養(yǎng),，控制///佳的收獲時(shí)機(jī),，避免培養(yǎng)過程中抗體聚集 | |
低pH洗脫液中，加入保護(hù)劑（Arg等） | ||
低pH洗脫后,，快速中和 | ||
適當(dāng)降低親和層析柱進(jìn)樣量 | ||
樣品處理和純化過程中,，保持低溫（4-8℃） | ||
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格（mL） | 價(jià)格（元） |
蛋白A瓊脂糖純化樹脂 | 36401ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 546/2186/7426 |
蛋白A瓊脂糖快速純化樹脂 | 36402ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 866/2656/8856 |
蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂 | 36403ES03/05/08/25/60 | 1/2/5/25/100 | 278/538/878/2886/7426 |
蛋白A/G瓊脂糖快速純化樹脂 | 36404ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 978/3186/8726 |
蛋白G瓊脂糖純化樹脂 | 36405ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 546/2186/7426 |
蛋白G瓊脂糖快速純化樹脂 | 36406ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 978/3186/8726 |
蛋白L瓊脂糖純化樹脂 | 36407ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 2488/9988/16488 |
蛋白L瓊脂糖快速純化樹脂 | 36408ES08/25/60 | 5 /25 /100 | 2868/13288/27688 |
蛋白A純化預(yù)裝柱，1mL | 36409ES03/08 | 1 mL/5×1 mL | 528/2218 |
蛋白A純化預(yù)裝柱,，5mL | 36410ES08/25 | 5 mL/5×5 mL | 1848/6838 |
蛋白G純化預(yù)裝柱,，1mL | 36413ES03/08 | 1 mL/5×1 mL | 528/2218 |
蛋白G純化預(yù)裝柱，5mL | 36414ES08/25 | 5 mL/5×5 mL | 1848/6838 |
蛋白L純化預(yù)裝柱,，1mL | 36415ES03/08 | 1 mL/5×1 mL | 938/3748 |
蛋白L純化預(yù)裝柱,，5mL | 36416ES08/25 | 5 mL/5×5 mL | 3528/14088 |
蛋白A/G免疫沉淀磁珠 | 36417ES03/08 | 1/5 | 787/2937 |
參考文獻(xiàn)
[1] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells[J]. EBioMedicine, 2019, 41: 395-407.
[2] Jiang S, Liu Y, Shen Z, et al. Acetylome profiling reveals extensive involvement of lysine acetylation in the conversion of muscle to meat[J]. Journal of proteomics, 2019, 205: 103412.
[3] Zhang F, Ni H, Li X, et al. Lnc RNA FENDRR attenuates adriamycin resistance via suppressing MDR 1 expression through sponging HuR and miR‐184 in chronic myelogenous leukemia cells[J]. FEBS letters, 2019.
[4] Sun Z, Wang Z, Li L, et al. RAGE/galectin-3 yields intraplaque calcification transformation via sortilin[J]. Acta diabetologica, 2019, 56(4): 457-472.
附表:
附表1 蛋白A和蛋白G對不同免疫球蛋白的結(jié)合力
免疫球蛋白來源 | 亞類 | 蛋白A結(jié)合力 | 蛋白G結(jié)合力 |
人類Human | IgG | +++ | +++ |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | +++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgA | 可變的 | - | |
IgA1 | + | - | |
IgA2 | + | - | |
IgD | - | - | |
IgE | ++ | - | |
IgM | + | - | |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
牛Cow | IgG | + | +++ |
IgG1 | + | +++ | |
IgG2 | +++ | +++ | |
貓Cat | IgG | +++ | + |
馬Horse | IgG | ++ | ++++ |
山羊Goat | IgG | + | ++ |
IgG1 | + | +++ | |
IgG2 | +++ | +++ | |
豚鼠Guinea pig | IgG1 | ++ | + |
IgG2 | ++ | + | |
綿羊Sheep | IgG | + | ++ |
IgG1 | + | ++ | |
IgG2 | +++ | +++ | |
狗Dog | ++ | + | |
豬Pig | +++ | ++ | |
大鼠Rat | IgG | + | ++ |
IgG1 | - | + | |
IgG2a | - | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | |
IgG2c | ++ | ++ | |
IgG3 | + | ++ | |
小鼠Mouse | IgG | ++ | ++ |
IgG1 | + | ++++ | |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
IgM | - | - | |
雞Chicken | IgY | - | - |
恒河猴Monkey rhesus | IgG | ++++ | ++++ |
倉鼠Hamster | + | ++ | |
考拉Koala | - | + | |
美洲駝Llama | - | + |
HB190819
