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羥胺殘留量測定法

本法系依據(jù)在堿性條件下,，羥胺與碘反應(yīng)生成亞硝

酸. 然后與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與CT萘胺偶

聯(lián)形成有色的偶氮化合物,，采用紫外-可見分光光度法測

定羥胺的含童,。

試劑（1) 6%乙酸鈉溶液稱取無水乙酸鈉6g，加

適顯水溶解并稀釋至100ml混勻,，即得,。

(2) 1% 對氨基苯磺酸溶液稱取對氨基苯磺酸

0. 50g，加適M 2 5 %乙酸溶液溶解后稀釋至50ml,，即得,。

(3) 1 . 3 %碘溶液稱取碘0.65g ; 溶于冰醋酸，稀

釋至5 0 m l ,即得,。于通風(fēng)櫥中配制和使用,。

(4) 0. 4mol/L硫代硫酸鈉溶液稱取硫代硫酸鈉

3. 16g，溶于適量水中,，稀釋至5 0 m l ,即得,。

(5) 0. 6 % a-萘胺溶液稱取a-萘胺0. 3 g . 溶于30%

乙酸，稀釋至50ml,，即得,。于通風(fēng)櫥中配制和迚jfl。

鹽酸羥胺對照品溶液的制備用水將鹽酸羥胺對照品

定M 稀釋至每l m l含lOOOnmol,，作為貯備液,。精密量取

貯備液適量，用水定量稀釋至每l m l含150nmol,、

120nmol,、90nmol、60nmol 和 30nmol,，作為不同濃度的對照品溶液,，用前配制。

測定法精密量取供試品0.3ml置試管內(nèi),，依次加

6 % 乙酸鈉溶液1.3ml,、1 % 對氨基苯磺酸溶液0.2ml及

1 . 3 %碘液0.1ml，混勻，放置1 0分鐘,，加0. 4mol/L硫

代硫酸鈉溶液50M1,，混勻脫色，加0. 6 % a-萘胺溶液40^1,，

混勻,，室溫放置6 0分鐘，經(jīng)每分鐘10 000轉(zhuǎn)離心5 分鐘

后,，取上清液,，照紫外-可見分光光度法C通則0401) , 在

波長52 0 n m處測定吸光度。精密量取不同濃度的對照品

溶液各0.3tnl,，置試管中,，自“依次加6% 乙酸鈉溶液

中國藥典2015年版

1.3ml”起，同法操作,。精密量取水0.3ml置試管中,，自

“加6 % 乙酸鈉溶液1.3ml”起，同法操作,，作為空白對

照,。以對照品溶液的羥胺濃度對相應(yīng)吸光度作直線回歸，

求得直線回歸方程,；將測得的供試品的吸光度代人直線回

歸方程,，即得供試品的殘留羥胺濃度（nmol/ml) ，再根據(jù)

供試品的蛋白質(zhì)含量按下式計(jì)算出羥胺殘留量（nmol/mg

蛋白質(zhì)）,。 •

供試品羥胺殘留量— 供試品的殘留羥胺濃度（nmol/ml)

(nmol/mg蛋白質(zhì)） 供試品的蛋白質(zhì)含量（mg/ml)