羥胺殘留量測定法
本法系依據(jù)在堿性條件下，羥胺與碘反應生成亞硝
酸. 然后與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應,，再與CT萘胺偶
聯(lián)形成有色的偶氮化合物,，采用紫外-可見分光光度法測
定羥胺的含童。
試劑（1) 6%乙酸鈉溶液稱取無水乙酸鈉6g,，加
適顯水溶解并稀釋至100ml混勻,，即得。
(2) 1% 對氨基苯磺酸溶液稱取對氨基苯磺酸
0. 50g,，加適M 2 5 %乙酸溶液溶解后稀釋至50ml,，即得。
(3) 1 . 3 %碘溶液稱取碘0.65g ; 溶于冰醋酸,，稀
釋至5 0 m l ,即得,。于通風櫥中配制和使用。
(4) 0. 4mol/L硫代硫酸鈉溶液稱取硫代硫酸鈉
3. 16g,，溶于適量水中,，稀釋至5 0 m l ,即得。
(5) 0. 6 % a-萘胺溶液稱取a-萘胺0. 3 g . 溶于30%
乙酸,，稀釋至50ml,，即得。于通風櫥中配制和迚jfl,。
鹽酸羥胺對照品溶液的制備用水將鹽酸羥胺對照品
定M 稀釋至每l m l含lOOOnmol,，作為貯備液。精密量取
貯備液適量,，用水定量稀釋至每l m l含150nmol,、
120nmol、90nmol,、60nmol 和 30nmol,，作為不同濃度的對照品溶液，用前配制,。
測定法精密量取供試品0.3ml置試管內(nèi),，依次加
6 % 乙酸鈉溶液1.3ml、1 % 對氨基苯磺酸溶液0.2ml及
1 . 3 %碘液0.1ml,，混勻,，放置1 0分鐘，加0. 4mol/L硫
代硫酸鈉溶液50M1,，混勻脫色,，加0. 6 % a-萘胺溶液40^1,，
混勻，室溫放置6 0分鐘,，經(jīng)每分鐘10 000轉離心5 分鐘
后,，取上清液，照紫外-可見分光光度法C通則0401) , 在
波長52 0 n m處測定吸光度,。精密量取不同濃度的對照品
溶液各0.3tnl,，置試管中，自“依次加6% 乙酸鈉溶液
中國藥典2015年版
1.3ml”起,，同法操作,。精密量取水0.3ml置試管中，自
“加6 % 乙酸鈉溶液1.3ml”起,，同法操作,，作為空白對
照。以對照品溶液的羥胺濃度對相應吸光度作直線回歸,，
求得直線回歸方程,；將測得的供試品的吸光度代人直線回
歸方程，即得供試品的殘留羥胺濃度（nmol/ml) ,，再根據(jù)
供試品的蛋白質(zhì)含量按下式計算出羥胺殘留量（nmol/mg
蛋白質(zhì)）,。 •
供試品羥胺殘留量— 供試品的殘留羥胺濃度（nmol/ml)
(nmol/mg蛋白質(zhì)） 供試品的蛋白質(zhì)含量（mg/ml)
14
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務