3 1 0 2唾液酸測定法
(間苯二酚顯色法）
本法系用酸水解方法將結(jié)合狀態(tài)的唾液酸變成游離狀
態(tài)，游離狀態(tài)的唾液酸與間苯二酚反應(yīng)生成有色化合物,，再
用有機酸萃取后,，測定唾液酸含量。
睡液釀對照品溶液（200pg/inl)的制備精密稱取唾液
酸對照品10.52mg(lMg 唾液酸相當于3. 24mnol),，置10ml
量瓶中,，加水溶解并稀釋至刻度，混勻,，即為唾液酸貯備液
( lm g /m l) ,按一次使用量分裝,，一7CTC貯存，有效期1 年,。
僅可凍融1次,。4°C保存使用期為2 周,。精密量取唾液酸貯
備液l m l ,置5m l量瓶中，加水至刻度,，即為每lm l含
200Mg 的唾液酸對照品溶液,，用前配制。
用于C 群腦膜炎奈瑟球菌多糖疫苗唾液酸含量測定時,，
同法制備濃度為400Mg /m l的唾液酸對照品溶液貯備液（精
密稱取唾液酸40mg,，置100ml量瓶中，用純化水溶解并定
容至刻度,，混勻,，即得）。精密量取唾液酸貯備液2.0ml,，
置10ml量瓶,、中，加水至刻度,，即為每lm l含唾液酸80邶的
唾液酸對照& 溶液,，用前配制。
測定法取供試品適量,，加水稀釋至蛋白質(zhì)濃度為每
. 226 .
lm l含0.2.0.4mg,，作為供試品溶液。按下表取唾液酸對
照品溶液,、水及供試品溶液于10ml玻璃試管中,，混勻，每
管再加人間苯二酚-鹽酸溶液（分別量取2% 間苯二酚溶液
2.5ml,、0. lm o l/L 硫酸銅溶液 62. 5^1,、25% 鹽酸溶液 20ml，
加水稀釋至25ml,，混勻,。試驗前4 小時內(nèi)配制）lm l，加蓋,，
沸水煮沸3 0分鐘（水浴面高于液面約2cm),，取出置冰浴中3
分鐘（同時振搖)后，每管加乙酸丁酯-丁醇溶液（取4 體積乙
酸丁酯與1 體積丁醇混勻,，室溫下保存,，1 2小時內(nèi)使用）
2ml，充分混勻,，室溫放置1 0分鐘,，照紫外-可見分光光度
法（通則0401)，在波長580nm處測定吸光度,。
唾液酸含量(Mg)
供試品
空白2 4 5 6 8
唾液酸對照品溶液(卩1) 10 20 25 30 40
水( Ml) 100 90 80 75 70 60
供試品溶液( Ml) 100
腦膜炎球菌疫苗唾液酸含量測定：取含唾液酸約4CVg/ml
的供試品溶液和純水對照各2ml, 另分別取唾液酸對照品
(80/^g/ml) 0. lm l,、0.2ml,、0_4ml、0_ 8ml,、1.6ml 于各管中,，
補水至2，O m l為標準曲線各點,。各管加2 m l顯色劑
(0. lm o l/L硫酸銅溶液0.5ml,、4%間苯二酚溶液5ml，濃鹽
酸80ml,，補水至100ml混勻,。臨用現(xiàn)配）搖勻，沸水浴15
分鐘后冰浴5.10分鐘,，每管加4m l有機相（正丁醇15ml,，
加乙酸丁酯定容至100ml)，充分搖勻后置室溫10分鐘,。以
純水對照為0 點,，于585nm測定吸光度，并作直線回歸,。
(可按比例縮小供試品及各試劑體積）
以唾液酸對照品溶液的濃度對其相應(yīng)的吸光度作直線回
歸（相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0 .99)，由直線回歸方程計算5Mg 唾液
酸的吸光度值,，再按下式計算供試品唾液酸含量,。
促紅素供試品唾液酸含量— A 2X 5X3. 2A XW X n
(mol/mol 蛋白質(zhì)） A7XPXTOO
式中烏為5Mg 唾液酸的吸光度；
A 2為供試品的吸光度,；
. 為供試品稀釋倍數(shù),；
P 為供試品蛋白質(zhì)含量，Mg /p l;
W 為lrn n o l促紅素的量（不包括糖成分量）,，相當
于 30. 6/xg0
腦膜炎奈瑟球菌多糖疫苗供試品唾液酸含量（/ x g /m l) =
A X n中A 為供試品溶液吸光度相對于唾液酸對照品溶液的濃
度,，fig /m li
n 為供試品的稀釋倍數(shù)。
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