土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒

可見分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用,；用不完的試劑 4℃保存,； 試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存,。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支,，4℃保存，10mg 無(wú)水葡萄糖,。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

S-AI 在 pH 為 4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一。

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng),，生成棕紅色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收,，在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比,。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋,、移液器、1mL 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水、甲苯,。

操作步驟：

一,、樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50  目篩,。

二,、測(cè)定步驟及加樣表：

1 、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ,，波長(zhǎng)調(diào)至 540nm ,，蒸餾水調(diào)零。

2 ,、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 4 ,、3 、2 ,、1 ,、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,。

3 ,、加樣表：

混勻,，煮沸 10min 左右 (蓋緊,，以防止水分流失) ，流水冷卻后充分混勻,，540nm 處蒸餾水調(diào)

零,，記錄各管吸光值A ，記為 A 測(cè)定管,、A 對(duì)照管,、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管,。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照 管,，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

三,、S-AI 活性計(jì)算：

1 ,、  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以葡萄糖濃度為 x 軸，相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b；將ΔA 帶 入公式得到 x  ( mg/mL)

2 ,、  S-AI 活性計(jì)算

單位定義：37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位,。

S-AI  (U/g) =x×V 酶促÷W÷T

V 酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.820mL,；W：樣本鮮重,，g；T：反應(yīng)時(shí)間：1/24d,；

注意事項(xiàng)：

1 ,、如果加入試劑三，煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn),，建議離心除去沉淀 (10000rpm ,，2min ) ,，取上 清測(cè)定吸光度,；

2 、如果吸光值大于 1 ,，可以將上清液再進(jìn)行稀釋,；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數(shù),。兩種 操作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù),。

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