規(guī)格：100 管/48 樣

ATP含量試劑盒說明書

微量法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,，是生物能量通貨,，能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù),。測定ATP含量并且計算能荷,，能夠反映能量代謝狀態(tài),。

測定原理：

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,，以此反應ATP含量。

自備儀器和用品：

分光光度計/酶標儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板,、研缽和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

酸性提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存,； 堿性提取液：液體 60mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 支,，4℃保存,；臨用前加入 1mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存,；

試劑二：液體 1.5mL×1 支,，4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶,，4℃保存,；臨用前加入 500μL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存一周,；

試劑四：液體 5mL×1 瓶,，4℃保存； 試劑五：液體 25mL×1 瓶,，4℃保存,；

標準液：液體 10mL×1 瓶，2μmol/mLATP 標準液，4℃保存,；

ATP 提?。?/span>

1、血清（漿）中ATP的提?。?/span>按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約0.1mL血清（漿）,，加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿,，8000g 4℃離心 10min,；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和,，混勻,，8000g4 ℃ 離心 10min，取上清,，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）,。

2、組織中 ATP 的提?。?/span>按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿,，8000g 4℃離心10min,，取上清至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和,，混勻,，8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）,。

3、細胞或細菌中ATP的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內(nèi),，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL 酸性提取液）,，超聲波破碎1min（冰浴,，強度20％或200W，超聲2s,，停1s）,，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中,，加入等體積的堿性提取液使之中和,，混勻,，8000g 4℃ 離心 10min，取上清,，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）,。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長到700nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、顯色劑的配制：臨用前請根據(jù)擬用顯色劑體積（樣本數(shù)×0.2 mL）,，按試劑四(mL)：試劑五（mL）=1：5 的比例配制。用多少配多少,。

3,、樣本測定：

37℃水浴20min后,，700nm下測定各管吸光值

注意 ：空白管和標準管通常只需要各做一個,。每個測定管設一個對照管。

ATP 含量計算：

1,、血清（漿）中ATP含量計算

ATP含量(μmol/mL)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)×V1]÷(V3×V1÷ V2)=40×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)

2,、組織、細菌或細胞中ATP含量計算

（1） 按蛋白濃度計算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)×V1]÷(V1÷ Cpr）=2×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷Cpr

蛋白質(zhì)含量需要另外測定,。

（2） 按樣本鮮重計算

ATP含量（μmol/g 鮮重)=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)×V1]÷(W×V1÷ V2)=4×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

ATP含量(μmol/104cell）=[C標準管×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)×V1]÷(500× V1÷V2)=0.008×(A測定管－A對照管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C 標準管：標準液濃度，2μmol/mL,；V1：加入反應體系中樣本體積,，0.01mL；V2：加入提取液體積,，2mL,；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,； W：樣本質(zhì)量， g,；500：細胞或細菌總數(shù),，500 萬。

注意：最DI檢測限為 10nmol/mL 或10nmol/g鮮重或 0.1nmol/mg prot

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