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本方案適用食品中牛乳鐵蛋白的測(cè)定,。

(1)磷酸鹽緩沖液Ⅰ：稱(chēng)取 30.08g十二水合磷酸氫二鈉,，2.50g二水合磷酸二氫鈉，加入800mL去離子水溶解,，再加入20mL乳鐵蛋白提取劑^*,，用純水定容至1L，混勻,。

(2) 磷酸鹽緩沖液Ⅱ：稱(chēng)取15.04g十二水合磷酸氫二鈉,，1.25g二水合磷酸二氫鈉，5.84g氯化鈉,，加適量水溶解,，定容至1L,，混勻。

(3) 洗脫溶液：稱(chēng)取7.1g十二水合磷酸氫二鈉,，58.4g氯化鈉,，用適量水溶解，并定容至1L,。

*乳鐵蛋白提取劑隨貨(肝素免疫親和柱ProElut^® HP IAC)附贈(zèng),，可有效增加提取效率和凈化效率。

稱(chēng)取5g樣品到50mL離心管中,，加入25mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ,，漩渦振蕩5min，然后在4℃,，10000r/min條件下離心15min,，去除上層奶脂用大量程移液器取出中間層10mL作為上樣液待凈化。

ProElut^® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)

(1)活化：將10mL注射器連接于親和柱上端,，放掉柱管保護(hù)液,，取5mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化親和柱；

(2)上樣：取提取樣液10mL過(guò)柱凈化(控制流速1-3mL/min),，棄去流出液,；

(3)淋洗：溶液全部過(guò)柱后，加入10mL磷酸鹽緩沖溶液Ⅱ淋洗,，甩干柱內(nèi)水分,；

(4)洗脫：加入4mL洗脫溶液進(jìn)行洗脫并收集，洗脫液混勻過(guò)0.22μm水系濾膜,，待液相色譜檢測(cè),。

色譜柱：Bio-Bond^® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：50μL

柱溫：30℃

檢測(cè)器：PDA 280nm

流動(dòng)相：A:乙腈   B:0.1%三氟乙酸水溶液

梯度設(shè)置：

(1) 肝素親和柱隨貨附贈(zèng)了乳鐵蛋白提取劑，有效增加了提取效率和凈化效率,。

(2) 液體牛奶樣品在50mg/kg,、100mg/kg、200mg/kg添加濃度水平上的回收率均大于85%,，回收驗(yàn)證合格,。