N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG） 試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶,，廣泛存在于各種組織,、體液和細(xì)胞中，以前列腺和腎近曲小管細(xì)胞內(nèi)含量最高,。NAG 活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān),。

測(cè)定原理： 

NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰,，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算 NAG 活性。

自備用品：

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、96 孔板/微量石英比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存,；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水，充分溶解備用,；用不完的試劑仍-20℃保存,。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 13mL×1 瓶,，4℃保存,。粗酶液提取：

1,、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）； 15000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測(cè)。

2,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。15000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測(cè),。

3,、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1,、 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、樣本測(cè)定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑）：

迅速混勻，放入 37℃保溫 30min

充分混勻,， 400nm 處測(cè)定吸光值 A,，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

NAG 活性計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.00585x +0.0083；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL）,，y 為吸光值,。

2,、血清（漿）NAG 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷V 樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)

3,、細(xì)胞,、細(xì)菌和組織中 NAG 活力的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.08×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.07mL,；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.01mL；V 樣總： 加入提取液體積,，1mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500 萬(wàn),；T：反應(yīng)時(shí)間，30min,。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.0039x +0.0083；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL）,，y 為吸

光值,。

2、血清（漿）NAG 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷V 樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)

3,、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 NAG 活力的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.12×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，0.07mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.01mL,；V 樣總： 加入提取液體積，1mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g,； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500 萬(wàn)；T：反應(yīng)時(shí)間,，30min,。

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3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療,。

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