總膽固醇（TC）含量檢測(cè)試劑盒

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

總膽固醇（Total Cholesterol,，TC）是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和，包括游離膽固醇和膽固醇酯,。

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA）,，從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為 FC；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,，生成△4-膽甾烯酮和 H₂O₂,；最后利用過(guò)氧化物酶催化H₂O₂ 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類(lèi)化合物,，其在 500nm 有特征吸收峰,，其顏色深淺與TC 含量成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、天平,、低溫臺(tái)式離心機(jī),、玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍,、

EP 管,、蒸餾水、異丙醇,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：異丙醇 50mL×1 瓶,，自備，4℃保存,； 工作液：液體 60mL×1 瓶,，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支,，10mg 膽固醇,，4℃保存。臨用前加入517μL提取液,，振蕩溶解,，即為50μmol/mL 的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。

操作步驟：

一,、樣本處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,，加入 1mL

提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,，4℃離心 10min,，取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 2 秒,，間隔 3 秒,，總時(shí)間 3min）；然后 10000g,，4℃離心 10min,，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）樣品：直接測(cè)定,。二,、測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm,，蒸餾水調(diào)零。

2、 將 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 2.5,、1.25,、0.625、0.3125,、0.15625,、0.078μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3,、 操作表：(在離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑)

總膽固醇含量計(jì)算

一,、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制：

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）

二,、總膽固醇含量的計(jì)算：

1. 血清（漿）中 FC 含量計(jì)算： TC 含量（μmol/dL）=x×100,。

2. 組織中 FC 含量計(jì)算：

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr,。

2. 按樣本鮮重計(jì)算

TC 含量（μmol/g 鮮重）=x×V 提取÷W= x÷W

3. 細(xì)胞,、細(xì)菌中 TC 含量計(jì)算：

TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。

100：1dL=100mL,；V 提?。杭尤霕颖镜奶崛∫后w積，1mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500:500 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞數(shù)量,。

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注意事項(xiàng)

1,、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作,；

2,、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請(qǐng)務(wù)必按照建議的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存,；

3,、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療,。

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