超氧化物歧化酶（SOD）NBT法試劑盒

測定意義：

SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用,，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,，也是 H2O2 主要生成 酶,，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

測定原理：

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O^2-.),，O^2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,，后者在 560nm 處有吸收,；SOD 可清除 O^2-.,，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深,， 說明 SOD 活性愈低,，反之活性越高。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：15mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存,，用時(shí)加入27ml蒸餾水，充分搖勻懸濁液,；

試劑三：液體 175μL×1 支,，4℃保存,；(與蒸餾水1：1稀釋后再使用)

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存,。

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備： 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

2,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,， 加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

3,、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 560nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、測定前將試劑一、二和四 37℃（哺乳動(dòng)物）25℃（其他物種）水浴 5min 以上,。

3,、樣本測定（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，室溫靜置 30min 后,，加入 1mL 玻璃比色皿,，560nm 處測定各管吸光值 A。

注意事項(xiàng)：

1,、試劑三為酶,，不可冷凍,，使用時(shí)在冰上放置。

2,、對照管只需要做一管,。

SOD 活性計(jì)算：

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率＝(A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管× 100%

盡量使樣本的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi),。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 30%或大于 70%,，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,，則需將樣本用 提取液適當(dāng)稀釋,；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣本,。 2,、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時(shí)，反應(yīng)體系 中的 SOD 酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL),。

3,、SOD 酶活性計(jì)算：

（1）血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù)

（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計(jì)算：

a.按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)×樣本稀釋倍數(shù)

=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù) 需要另外測定,，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒,。

b.按樣本鮮重計(jì)算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋 倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數(shù)

c.按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

SOD 活力(U/10⁴ cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋 倍數(shù)=0.0228×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.026mL,；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.09mL；V 樣總： 加入提取液體積,，1 mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL ,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)胞或 細(xì)菌總數(shù),，500 萬

上海語純生物科技有限公司，是由具有*生命科學(xué),、生物技術(shù)背景人員共同創(chuàng)辦的技術(shù)企業(yè),。公司專注于原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑產(chǎn)品,，為高校,、食品、醫(yī)藥,、生物研究等領(lǐng)域提供相關(guān)技術(shù)支持和服務(wù),。

公司自成立以來通過不斷地科技創(chuàng)新,，產(chǎn)品研發(fā)，已為客戶提供定制化細(xì)胞產(chǎn)品以及完整的細(xì)胞培養(yǎng)解決方案,，通過積極地探索,、研發(fā)、深化和豐富產(chǎn)品,，目前基礎(chǔ)培養(yǎng)基產(chǎn)品種類多達(dá)200多種,，細(xì)胞系300多種，原代細(xì)胞接近600種,。我們始終以“發(fā)展科學(xué)技術(shù),，關(guān)愛公眾生命健康”為動(dòng)力，通過技術(shù)創(chuàng)新,，廣泛吸納高科技人才,，不斷完善產(chǎn)品體系、豐富產(chǎn)品鏈,，積極拓展市場,，擴(kuò)充應(yīng)用領(lǐng)域，,，建立了具有市場競爭力的“語純”品牌,。

注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作,；

2、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果,，請務(wù)必按照建議的儲存條件進(jìn)行保存,；

3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療,。

超氧化物歧化酶（SOD）NBT法試劑盒