試劑名稱：Fluo-4?Pentapotassium?Salt，Fluo-4五鉀鹽

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年,，冰袋運輸,。

廠家：西安強化生物

分子式：C36H25F2K5N2O13

分子量：927.08

一、描述與基本特性：

Fluo-4?Pentapotassium?Salt,，Fluo-4五鉀鹽是一種鈣離子熒光探針,，具有非細胞膜滲透性，需通過微注射,、膜片電極或劃痕標記等方式加載進入細胞以檢測胞內鈣離子水平 ,。

其在無鈣離子存在時幾乎不發(fā)光，但與鈣離子結合后熒光強度至少增加100倍,，激發(fā)波長為494 nm,，發(fā)射波長為516 nm 。

此外,，Fluo-4五鉀鹽的解離常數(shù)（Kd）為345 nM（Ca2+）,，適用于檢測高瞬時鈣離子濃度 。

核心應用：細胞內鈣離子動態(tài)監(jiān)測

檢測原理：鈣結合后觸發(fā)分子內電荷轉移,，激活熒光團,。

適用場景：

瞬態(tài)鈣信號：如神經(jīng)元動作電位,、心肌細胞鈣震蕩。

設備兼容性：激光共聚焦顯微鏡,、流式細胞儀,、熒光酶標儀。

對比優(yōu)勢：

較Fluo-3熒光強度提升近一倍,，激發(fā)效率更高,。

選擇性優(yōu)于其他二價陽離子。

細胞加載方法

膜滲透性：非滲透性,。

加載方式：

微注射,、膜片鉗電極、劃痕標記,、胞飲作用,。

固定化應用：通過EDC/EDAC處理可原位固定于細胞，兼容免疫熒光研究,。

二,、合成方法與制備

1. 合成路線關鍵步驟

母體結構修飾：以Fluo-3為基礎，氯離子（Cl?）替換為氟離子（F?）,。

氟化反應：

可能涉及KF催化（如離子對促進劑[(n-Bu)?N?]?SO??）在t-BuOH/H?O中90°C反應,。

或使用NFSI（N-氟代雙苯磺酰亞胺）在低溫條件下進行。

成鹽步驟：羧酸前體與氫氧化鉀中和,，生成五鉀鹽以提升水溶性,。

2. 工業(yè)純化與質控

大規(guī)模自動化合成，色譜純化確保純度≥90%,。

質量控制：HPLC驗證純度,，避免雜質干擾鈣結合。

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