試劑名稱：Firefly Luciferase,，Recombinant重組螢火蟲熒光素酶

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年,，冰袋運輸。

產(chǎn)地：西安強化生物

CAS：61970-00-1

分子量：~60kDa

狀態(tài)：液體

一,、描述與基本特性：

重組螢火蟲熒光素酶是一種通過基因工程手段表達(dá)的酶,，源自北美螢火蟲（Photinus pyralis）的熒光素酶基因（luc），通常在大腸桿菌（E. coli）系統(tǒng)中重組表達(dá),。

重組表達(dá)的優(yōu)勢

穩(wěn)定性與一致性：相比天然提取的酶,，重組技術(shù)消除了季節(jié)性和地域性差異，確保批次間的高度一致性,。

高純度與活性：典型活性≥1×1011 units/mg蛋白,，可凍干保存（凍干粉）或以緩沖液形式（液體）提供。

工程化改良：部分版本通過基因修飾增強熱穩(wěn)定性,，適用于需長期保存或高溫反應(yīng)的實驗,。

【催化機制與生物學(xué)功能】

兩步催化反應(yīng)（依賴ATP、Mg2?,、O?）：

(1) 熒光素 + ATP → 熒光素酶 → 熒光素腺苷酸 + PPi

(2) 熒光素腺苷酸 + O? → 氧熒光素 + AMP + 光子（λmax=560 nm）

關(guān)鍵輔因子：Mg2?穩(wěn)定ATP結(jié)合,，鈣離子可加速反應(yīng)。

生物學(xué)功能

報告基因系統(tǒng)：檢測啟動子活性,、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,、miRNA靶向作用。

ATP定量：靈敏度達(dá)1 fmol ATP（0.2 μg酶）,。

活體成像：非侵入性監(jiān)測基因表達(dá),。

二、生產(chǎn)與純化技術(shù)

（一）重組表達(dá)系統(tǒng)

表達(dá)宿主：大腸桿菌,。

載體：pET系列,，含組an酸標(biāo)簽便于純化。

基因來源：北美螢火蟲,，與日本螢火蟲基因同源性60-80%,。

（二）純化工藝

L344A突變提升熱穩(wěn)定性。

定向進(jìn)化篩選耐熱突變體,。

親和層析：鎳柱固定金屬離子親和層析,。

收率：約2 mg/L培養(yǎng)液，純度≥98%,。

突變體優(yōu)化：

L344A突變提升熱穩(wěn)定性。

定向進(jìn)化篩選耐熱突變體,。

（三）制劑形式

液體：1 mg/mL于Tris-甘油緩沖液,，-20℃保存,。

凍干粉：含BSA和蔗糖保護(hù)劑，復(fù)溶于高鹽緩沖液,。

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用于科研相關(guān)領(lǐng)域,，不能用于人體實驗！

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