試劑名稱：Fluo-3 Pentapotassium Salt Fluo-3五鉀鹽

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年,，冰袋運輸,。

產(chǎn)地：西安強化生物

CAS NO： 853400-67-6

分子式：C36H25Cl2K5N2O13

分子量：959.99

一、描述與基本特性

Fluo-3 Pentapotassium Salt,，熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽,，可應(yīng)用于生物醫(yī)學研究。

化學結(jié)構(gòu)：基于熒光素骨架,，修飾BAPTA以增強Ca2+親和力 ,。

用途：用于檢測細胞內(nèi)游離Ca2+濃度，實現(xiàn)鈣動力學的實時監(jiān)測,。適用于流式細胞術(shù),、熒光顯微鏡等技術(shù)

作用機制：熒光強度與鈣離子結(jié)合的正相關(guān)

熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽的核心作用機制是 "熒光強度隨Ca2+濃度增強" ，具體過程如下：

無鈣狀態(tài)：游離的Fluo-3幾乎無熒光（量子產(chǎn)率極低）,，因發(fā)色團受BAPTA基團的電子轉(zhuǎn)移抑制而淬滅,。

鈣結(jié)合狀態(tài)：當結(jié)合Ca2+后，BAPTA的羧基與Ca2+螯合,，分子構(gòu)象變化解除發(fā)色團淬滅,，熒光強度增強60-100倍（增強80倍）。

動態(tài)響應(yīng)：熒光強度變化（ΔF）與Ca濃度呈正比,，其中解離常數(shù)為 390–450 nM,，適用于胞質(zhì)鈣濃度（~100 nM至μM級）檢測。

關(guān)鍵優(yōu)勢：單波長激發(fā)/發(fā)射設(shè)計兼容流式細胞儀,、共聚焦顯微鏡等設(shè)備,，無需比率測量即可快速動態(tài)監(jiān)測,。

二、實驗操作指南

（一）探針加載方法

細胞加載: 因膜滲透性差,，需通過微注射,、膜片鉗電極導(dǎo)入或劃痕標記法加載 。

工作液配制:

母液：高純度無水 DMSO 配制 2–5 mM 儲備液 ,。

工作濃度：2–20 μM,。

減少探針泄漏: 添加有機陰離子轉(zhuǎn)運體抑制劑：

Probenecid。

Sulfinpyrazone,。

（二）檢測流程

孵育: 工作液與細胞在室溫孵育 20–120 分鐘,，再置換緩沖液移除多余探針 。

檢測設(shè)備:

激發(fā)波長 506 nm,，發(fā)射波長 526 nm ,。

兼容氬離子激光器及流式 FL1 通道。

（三）干擾控制

重金屬干擾: BAPTA 結(jié)構(gòu)易結(jié)合 Zn2+/Mn2+等,，建議添加重金屬螯合劑 TPEN ,。

探針流出: 細胞類型差異導(dǎo)致保留時間不同，需在加載后 1–2 小時內(nèi)完成實驗 ,。

以上由西安強化生物小編xxn整理

用于科研相關(guān)領(lǐng)域,，不能用于人體實驗！

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