一文看懂 iTRAQ,、SILAC 和無(wú)標(biāo)記定量：有何區(qū)別與優(yōu)劣？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)研究中,，dànbáizhì定量是理解生物系統(tǒng)動(dòng)態(tài)變化的核心手段,。隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，iTRAQ,、SILAC 和無(wú)biāojìdìng量（Label-Free Quantification, LFQ）成為主流的三種定量策略,。它們各具特點(diǎn)，適用于不同實(shí)驗(yàn)需求,。

一,、iTRAQ：異位標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)高通量多樣本比較

1,、原理概述

iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）是基于同位素標(biāo)簽的相對(duì)定量技術(shù),。實(shí)驗(yàn)流程中，dànbáizhì樣本經(jīng)yídànbáiméi消化成肽段后,，用含有等質(zhì)量的同位素標(biāo)簽試劑（通常為4-plex,、6-plex或8-plex）進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記,。標(biāo)記后的樣本混合一起進(jìn)行質(zhì)譜分析,，依據(jù)MS/MS級(jí)別釋放的報(bào)告離子強(qiáng)度進(jìn)行定量比較,。

2,、優(yōu)勢(shì)分析

• 多樣本并行分析：一次實(shí)驗(yàn)可比較4至8個(gè)樣本，節(jié)省儀器時(shí)間，減少批次效應(yīng),。

• 高通量和高覆蓋率：特別適用于大規(guī)模生物學(xué)重復(fù)實(shí)驗(yàn)或多時(shí)間點(diǎn)研究,。

• 適配性強(qiáng)：可用于細(xì)胞、組織甚至復(fù)雜生物體樣本,。

3,、局限性提示

• 定量精度受限于混合策略：樣本混合比例若偏差,，將直接影響定量結(jié)果,。

• 低豐度蛋白信號(hào)易受抑制效應(yīng)干擾（Ratio Compression）：導(dǎo)致真實(shí)變化被低估。

• 成本較高：iTRAQ試劑價(jià)格昂貴,，對(duì)預(yù)算有限的項(xiàng)目存在一定壓力。

二,、SILAC：代謝標(biāo)記，確保高準(zhǔn)確度定量

1,、原理概述

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記必需氨基酸（如 ^13C6-賴氨酸,、^13C6-jīngānsuān），通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中自然代謝引入,。輕重標(biāo)簽樣本在培養(yǎng)階段即被標(biāo)記,，收獲后等量混合，共同進(jìn)行蛋白提取,、消化和質(zhì)譜檢測(cè),。

2、優(yōu)勢(shì)分析

• 定量準(zhǔn)確性jígāo：標(biāo)記發(fā)生在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中,，避免了后期樣本處理差異,。

• 簡(jiǎn)化下游操作流程：標(biāo)記后即可直接混合，減少批間偏差,。

• 動(dòng)態(tài)研究理想選擇：如細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),、藥物處理,、時(shí)間序列實(shí)驗(yàn)。

3,、局限性提示

• 局限于細(xì)胞系統(tǒng)：無(wú)法直接應(yīng)用于原代組織,、血漿等復(fù)雜樣本。

• 培養(yǎng)條件要求嚴(yán)格：需要無(wú)標(biāo)記氨基酸培養(yǎng)基,，并確保細(xì)胞充分置換標(biāo)記氨基酸,。

• 標(biāo)記成本和時(shí)間成本：對(duì)大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)提出較高要求。

三,、無(wú)biāojìdìng量（LFQ）：靈活且經(jīng)濟(jì)的定量選擇

1,、原理概述

無(wú)biāojìdìng量基于肽段離子峰面積或峰強(qiáng)度的直接比較，不需要任何同位素標(biāo)記,。通常結(jié)合高重復(fù)性的數(shù)據(jù)依賴采集（DDA）或數(shù)據(jù)獨(dú)立采集（DIA）策略,，通過(guò)jīngzhǔn的對(duì)齊和歸一化算法，實(shí)現(xiàn)不同樣本間蛋白豐度的相對(duì)定量,。

2,、優(yōu)勢(shì)分析

• 無(wú)需化學(xué)或代謝標(biāo)記：適用性極廣，可覆蓋所有類型的生物樣本,。

• 經(jīng)濟(jì)高效：特別適合預(yù)算有限或大樣本量的研究項(xiàng)目,。

• 適配zuì新質(zhì)譜平臺(tái)：如結(jié)合DIA策略，可極大提升數(shù)據(jù)完整性和重復(fù)性,。

3,、局限性提示

• 對(duì)質(zhì)譜儀穩(wěn)定性要求高：批次間小幅漂移也可能引發(fā)系統(tǒng)性偏差。

• 數(shù)據(jù)處理復(fù)雜：需要依賴先進(jìn)的軟件算法進(jìn)行峰提取,、對(duì)齊和歸一化,。

• 生物學(xué)重復(fù)數(shù)量需充足：以彌補(bǔ)單次采集中的潛在隨機(jī)誤差,。

四,、如何選擇適合的定量策略？

面對(duì)iTRAQ,、SILAC和無(wú)biāojìdìng量這三種方案,，選擇應(yīng)基于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本類型,、預(yù)算和數(shù)據(jù)精度需求綜合考慮：

??如果樣本量大,、需多條件比較，且預(yù)算充足,，iTRAQ是非常理想的選擇,。

??若關(guān)注動(dòng)態(tài)過(guò)程、且樣本來(lái)源于可培養(yǎng)細(xì)胞,，追求zuì高定量精度,，可以選擇SILAC,。

??當(dāng)樣本異質(zhì)性大或預(yù)算受xiànshí，且擁有高性能質(zhì)譜平臺(tái)和成熟的數(shù)據(jù)處理能力,，無(wú)biāojìdìng量則提供了靈活而經(jīng)濟(jì)的方案。

不同方法之間并不存在juéduì的優(yōu)劣之分,，關(guān)鍵在于與研究目標(biāo)的契合度。近年來(lái),，結(jié)合不同策略的混合定量方法也在快速發(fā)展,，如SILAC-LFQ結(jié)合、TMT-DIA整合,，為復(fù)雜生物學(xué)問(wèn)題提供了更為細(xì)致的數(shù)據(jù)解析能力,。

在dànbáizhì組學(xué)研究中,，選擇zuì合適的定量策略，是確保實(shí)驗(yàn)成功與數(shù)據(jù)可靠性的關(guān)鍵一步,。無(wú)論是傾向于iTRAQ,、SILAC還是無(wú)biāojìdìng量，理解各自技術(shù)特點(diǎn)和應(yīng)用邊界,，才能zuì大化發(fā)揮質(zhì)譜平臺(tái)的潛能,。作為科研伙伴，百泰派克生物科技始終致力于為廣大科研人員提供高質(zhì)量、定制化的定量蛋白組分析服務(wù),，助力科學(xué)探索更進(jìn)一步,。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù),，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題,?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別,。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì,、多肽,、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù),；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái),，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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