1,、自備材料：
PBS；多道排槍,；白色不透光/黑色細胞培養(yǎng)板,；化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀。
2,、檢測前準(zhǔn)備：
（1）預(yù)先將NLuc檢測底物（50×）和NLuc檢測底物緩沖液放置于室溫,。
（2）根據(jù)實際使用量，以1:50的比例將適量的NLuc檢測底物（50×）與NLuc檢測底物緩沖液混勻，室溫避光備用,。例如：如果需要10 mL反應(yīng)液,，則需要加入0.2 mL的檢測底物。
注：建議現(xiàn)配現(xiàn)用,，剩余的含有新型底物的反應(yīng)液在當(dāng)次實驗結(jié)束后不建議留存,。
3、操作方法：
（1）從細胞培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)板,，放置5-15 min,，恢復(fù)至室溫。
注：使用白色不透光或者黑色的細胞培養(yǎng)板,，減少孔間的信號干擾,。
（2）加入檢測溶液
使用多道排槍向每個細胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的反應(yīng)液，加樣體積與細胞培養(yǎng)液體積相同并混勻,。例如,，96孔板通常加入80-100μL 培養(yǎng)液，相應(yīng)加入80μL-100μL檢測溶液,；384孔板通常加入20-30μL 培養(yǎng)液,，相應(yīng)加入20-30μL檢測溶液。
（3）發(fā)光檢測
混勻后于化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀中檢測NLuc熒光素酶報告基因活性,。
注：為得到最佳檢測結(jié)果,，請在加入檢測試劑后1小時內(nèi)完成檢測。
4,、分析數(shù)據(jù)：
（1）實驗設(shè)計：根據(jù)不同實驗?zāi)康?，在每個培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對照組、實驗組和空白對照組,。為了保證實驗準(zhǔn)確性,，理論上每個實驗組（包括對照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對照組的螢火蟲螢光素酶的發(fā)光測量值。
①空白對照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細胞+反應(yīng)液,。
注：空白對照組的樣品量必須與實驗樣品量相同,，包含與實驗樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上相同的檢測試劑,。
②實驗組：轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)實驗化合物處理（即實驗組F）,。
③對照組：轉(zhuǎn)染細胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果（即對照組F）,。
（2）計算結(jié)果：
實驗組=實驗組F-背景F,。
對照組=對照組F-背景F。
表達倍數(shù)=實驗組/對照組,。

-20℃保存,，有效期一年,。NLuc檢測底物（50×）建議分裝-80℃保存。

1,、酶促反應(yīng)對溫度較為敏感,，加樣檢測前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25 ℃）再使用；
2,、檢測時需使用白色或黑色的96孔板,。如果使用普通透明的96孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾,；
3,、檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同,，測得的光信號值也會不同,；
4、單管熒光測定儀測定,，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)保持一致,；
5、為了您的自身安全,，實驗前請做好有效防護,；