產(chǎn)品簡介: 

該產(chǎn)品是我們研發(fā)團(tuán)隊(duì)在貼壁細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化研發(fā)成功的專門用于懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑,。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率在懸浮細(xì)胞中可高達(dá)85%以上（巨噬細(xì)胞,、EGFP質(zhì)粒）。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同,，它采用生物可降解材料配制,，對細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%,。其使用也非常方便,，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中,，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1,、較好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上,；

2,、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低,，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%,，大大降低了因細(xì)胞毒性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為客觀,；

3,、操作簡便,，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液,。

應(yīng)用：

適用細(xì)胞系：293F,，THP-1、RAW264.7,、BMDM,、CHO-S、Jurkat,， K562,、U937，NB4,、MSCs等,。

操作步驟 （以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:

1,、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細(xì)胞,，接種細(xì)胞量為2-4×105 個。

2,、 確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞比活度為90%以上,，且生長狀態(tài)良好。

3,、 如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板,，轉(zhuǎn)染時可以不用換液,，如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，轉(zhuǎn)染時最好換液。

B,、 SP/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):

1,、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul Trans buffer，再加入適量的DNA,，見附表,。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。

2,、使用前用移液器吹打混勻轉(zhuǎn)染試劑,，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻,。

3,、 將SP/DNA復(fù)合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管,。

C,、轉(zhuǎn)染:

1、將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強(qiáng)烈振蕩20-40秒,，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液,，無細(xì)胞結(jié)團(tuán)；

2,、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后,，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

3、 培養(yǎng)24-96小時后收獲,。

4,、 SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基,。因收獲蛋白需要,，可以使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)專用的無血清培養(yǎng)基。

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

保存方法：

2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年,，使用前請先將本品輕輕混勻,。

注意事項(xiàng)：

、1,、對于24孔板,，轉(zhuǎn)染前接種細(xì)胞量以（2-4）x105細(xì)胞為宜，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)保持良好,，不要有支原體污染,。

2、剛開始轉(zhuǎn)染,，建議進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn),，如24孔板，可將細(xì)胞接種3個孔,，每孔接種細(xì)胞數(shù)分別為2x105 ,、 3x105 、4x105,，次日質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果，選擇轉(zhuǎn)染陽性率較高的細(xì)胞接種數(shù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3,、應(yīng)避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備體系中存在血清,，因血清會干擾 SP 與DNA形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)染所用培養(yǎng)基中盡量不要使用抗生素,。
4,、為了提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔1小時人工振蕩1次（非常重要）,。
5,、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度大，且受細(xì)胞種類,、細(xì)胞密度,、細(xì)胞生長情況、培養(yǎng)方法,、操作手法等因素的影響,，研究者在轉(zhuǎn)染之前，應(yīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn),，認(rèn)真準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染方案,。
6、本試劑主要用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染,，如需質(zhì)粒DNA,、RNA、siRNA均可轉(zhuǎn)染的試劑,，請選擇SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑（abs60325）,。