細(xì)胞作為生命體結(jié)構(gòu)與功能的最小獨立單元,，始終是生命科學(xué)研究的基石，在探索生命奧秘的征程中占據(jù)核心地位：

1,、科研領(lǐng)域：細(xì)胞的增殖分化,、信號傳導(dǎo)、代謝調(diào)控等動態(tài)過程,，為解析生理機(jī)制與疾病發(fā)生提供關(guān)鍵靶點,，是揭秘生命進(jìn)程的核心工具；

2,、藥物研發(fā)：細(xì)胞模型是高通量篩選,、毒性評估及藥效驗證的核心載體，從早期化合物篩選到臨床前研究,，細(xì)胞活性檢測貫穿全程,。隨著基因編輯（如 CRISPR）及細(xì)胞治療技術(shù)的革新，細(xì)胞更成為攻克疾病的前沿 “藥物”,；

3,、生產(chǎn)領(lǐng)域：細(xì)胞化身微型生物工廠，為科研工作者高效產(chǎn)出抗體,、蛋白,、多肽等科研試劑與藥物，驅(qū)動生命科學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化,。

“我培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀況如何,？”，這是在實驗中當(dāng)細(xì)胞暴露于某種物質(zhì)或影響因素下,，科研工作者要問的首要問題,。這個問題可以通過對多種指征細(xì)胞活性的指標(biāo)進(jìn)行檢測來回答,，接下來小編將帶大家全面了解檢測細(xì)胞活性的三大類（共六種）方法，助力大家更好的選擇合適的方法,，快速搞定細(xì)胞活力檢測,。

1.明星方法，基于檢測細(xì)胞中ATP含量的方式測定細(xì)胞活性

細(xì)胞內(nèi)ATP（腺苷三磷酸）的含量是細(xì)胞能量代謝的直接指標(biāo),。ATP生物發(fā)光法通過測量細(xì)胞內(nèi)ATP的水平來評估細(xì)胞活性,。這種方法操作簡便，整個方案簡化成“加入-孵育-讀取”三步驟,，并且具有高靈敏度和寬動態(tài)范圍的特點,，尤其適合于需要高通量，且需要高靈敏度檢測的實驗,。

熒光素酶法檢測細(xì)胞活性原理圖

2.可與CTG-L試劑聯(lián)用,，基于活細(xì)胞蛋白酶活性，非裂解熒光法測定細(xì)胞活性

對于細(xì)胞活性檢測,，有時需要有內(nèi)參對照,，由此產(chǎn)生 multiplex 分析需求，即對同一樣本進(jìn)行多種分析方法同時檢測,，且要求分析檢測方法相互不干擾,，彼此檢測機(jī)理不同，如此可以進(jìn)行相關(guān)對比,，從而排除實驗因素外的數(shù)據(jù)差異,。本試劑檢測原理是檢測活細(xì)胞內(nèi)一種保守蛋白酶，活性僅與完好的活細(xì)胞有關(guān),?？纱┩讣?xì)胞膜的活性底物進(jìn)入活細(xì)胞后，被活細(xì)胞蛋白酶切割,，產(chǎn)生熒光信號,，信號的強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)量呈正比。當(dāng)細(xì)胞膜的完整性喪失,，并漏出到周圍培養(yǎng)基后,，該活細(xì)胞蛋白酶的活性會由于環(huán)境與細(xì)胞內(nèi)環(huán)境不同而消失。本試劑與CTG-L系列熒光素酶試劑盒檢測原理不同,，檢測方法也不同,，可以檢測到更早期的輕微的細(xì)胞損害，兩個檢測試劑相容性好,，可以進(jìn)行 multiplex 檢測,。此方法操作步驟簡單，“加入-孵育-讀取”三步驟即可完成實驗,，適合高通量檢測,。

活細(xì)胞蛋白酶活性檢測原題圖

3.傳統(tǒng)經(jīng)典方法,，基于線粒體脫氫酶還原性，測定細(xì)胞活性

基于線粒體脫氫酶活性的細(xì)胞活性檢測方法,，其機(jī)制主要依賴于線粒體脫氫酶在細(xì)胞代謝過程中的關(guān)鍵作用,。這種酶位于線粒體內(nèi)膜，能夠催化底物（通常是涉及氧化還原反應(yīng)的化合物）的脫氫過程,，將電子轉(zhuǎn)移給特定的電子受體（如MTT試劑中的顯色底物）,。

當(dāng)細(xì)胞具有活性時，線粒體功能正常,，脫氫酶活性較高,，能夠高效地將底物還原，使底物發(fā)生顏色變化（如MTT被還原為紫色結(jié)晶甲瓚）,。而當(dāng)細(xì)胞失去活性或活性降低時,，線粒體功能受損，脫氫酶活性下降,，底物還原反應(yīng)程度減弱,，顏色變化程度也隨之降低。

由于檢測底物不同,，此類方法又可細(xì)分為:
①MTT法：使用前需兩種組分預(yù)混,，工作液可被線粒體脫氫酶催化產(chǎn)生不容易水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)，需換液溶解產(chǎn)物,，測定570 nm吸光度,；
②MTS法，MTT升級產(chǎn)品,，使用前需兩種組分預(yù)混,，工作液可被線粒體脫氫酶催化產(chǎn)生溶于水的甲瓚(Formazan)產(chǎn)物，無需更換溶液,，更簡便,，需測定490 nm吸光度；
③CCK-8法,，MTT升級產(chǎn)品,，可以直接加入到細(xì)胞樣品中,不需要預(yù)配各種成分，檢測快速,，毒性非常低,，其有效底物WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜染料,，無需更換溶液,，更簡便,，需測定450 nm吸光度。
④阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）法,，主要成分為刃天青（resazurin）,，是一種細(xì)胞膜滲透性、無毒性且弱藍(lán)色熒光的指示劑,，做為MTT的替代物,，氧化態(tài)的刃天青呈紫藍(lán)色且基本無熒光，其還原態(tài)產(chǎn)物試鹵靈（resorufin）轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色且高度熒光,，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與呼吸活細(xì)胞數(shù)量呈正比,。阿爾瑪藍(lán)的顏色變化可通過普通分光光度計檢測吸光度變化，檢測波長為570 nm,，參考波長為600 nm,；阿爾瑪藍(lán)的熒光變化可通過熒光光度計檢測，激發(fā)波長在530~560 nm之間,，發(fā)射波長為590 nm,。

基于線粒體脫氫酶活性檢測細(xì)胞活性原理圖

以上三類就是目前檢測細(xì)胞活性的主要方法，小編也在這里匯總了這些方法的特點,，更方便大家根據(jù)實際需求去選擇,。

今天的講解就到這里,，后續(xù)還會有細(xì)胞凋亡和毒性的檢測方法匯總，敬請期待~

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