細(xì)胞殘留人白介素2（IL-2）ELISA 檢測(cè)試劑盒說明書

貨號(hào)： HG-IL002

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BlueKit®系列細(xì)胞殘留人白介素2（IL-2）ELISA檢測(cè)試劑盒采用雙抗夾心法，用于定量檢測(cè)血清,、血漿或細(xì)胞上清中人IL-2蛋白的含量,。將特異性抗人IL-2單克隆抗體包被在微孔板上，反應(yīng)孔內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本,、檢測(cè)抗體，室溫（18-25℃）孵育,，洗滌后再加入酶結(jié)合物（Streptavidin-HRP）孵育,。洗滌后加入顯色液TMB。顏色反應(yīng)的深淺與目標(biāo)蛋白濃度成正比,。
檢測(cè)范圍：7.81-500 pg/mL
靈  敏  度：0.59 pg/mL
精  密  度：CV%≤10%,，RE%≤±15%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物學(xué)樣本中人IL-2蛋白含量測(cè)定,。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為2~8℃ ,，有效期為12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器    

◆全新濾紙

◆微量加液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

試劑配制

1x 洗液根據(jù)實(shí)際用量,，取適量10x濃縮洗液用去離子水10倍稀釋,。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

人IL-2 標(biāo)準(zhǔn)品S 5000pg/mL 40μL+360μL SD 作為高標(biāo)準(zhǔn)（500pg/mL）。每個(gè)稀釋試管中加入200μL SD,，使用高標(biāo)準(zhǔn)制備1：1稀釋系列,。在進(jìn)行下一步轉(zhuǎn)移之前徹i底混合每個(gè)試管。SD用作零標(biāo)準(zhǔn)（0pg/mL）,。

操作步驟

檢測(cè)之前請(qǐng)將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫（18-25℃）,。
1. 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品,。
2. 將不需要的板條拆卸下來，放回鋁箔袋,，重新封好封口,。
3. 每孔加入50μL檢測(cè)緩沖液（AB）。
4. 加入 50μL 的標(biāo)準(zhǔn)品（S）,、樣本,。保證連續(xù)加樣，請(qǐng)不要間斷,。加樣過程在15分鐘內(nèi)完成,。
5. 每孔加入50μL檢測(cè)抗體（DA）。
6. 使用封板膜封板,。500轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,，室溫（18-25℃）孵育60分鐘。
7. 棄掉孔內(nèi)液體,，每孔加入300μL洗液洗板,，洗滌4次。每次洗板,，在吸水紙上拍干,。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須徹i底移除殘留液體,。
8.加入100μL酶結(jié)合物（SH）,。
9.使用新的封板膜封板。500轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,，室溫（18-25℃）孵育30分鐘,。
10.重復(fù)步驟7。
11.每孔加入100μL顯色液，避光室溫（18-25℃）孵育10-15分鐘,。
12.每孔加入100μL終止液,。
13.在30分鐘之內(nèi)，酶標(biāo)板450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值,，校正波長(zhǎng)設(shè)定為570nm或者630nm,。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見下例，僅為示例,，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng)OD值取1og后進(jìn)行直線擬合,，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖所示）

注意事項(xiàng)

1. 樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋,，以在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品,。
2. 試劑按標(biāo)簽說明儲(chǔ)存，使用前室溫（18-25℃）平衡,。
3. 包被酶標(biāo)板使用前,，請(qǐng)平衡至室溫（18-25℃）再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封,，4℃可保存一個(gè)月,。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4. 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。
5. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋,、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要,。
6. 洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印,。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水,。7. 底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,，避免與金屬接觸影響結(jié)果,。
8. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用,。

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