ApaLI內(nèi)切酶

ApaLI內(nèi)切酶（ApaLI restriction enzyme）是一種常用的限制性內(nèi)切酶,，屬于Ⅱ型內(nèi)切酶家族,。ApaLI內(nèi)切酶能夠識別并切割DNA中特定的核苷酸序列，具有特定的切割位置和特異性,。本文將對ApaLI內(nèi)切酶的基本特性,、作用機(jī)制、應(yīng)用領(lǐng)域等方面進(jìn)行詳細(xì)介紹,。

ApaLI內(nèi)切酶 的基本特性：

ApaLI內(nèi)切酶主要識別并切割DNA中的5'-GTGCAC-3'序列,，切位為該序列的ApaLI酶切位點(diǎn)。該酶切位點(diǎn)的特異性使ApaLI內(nèi)切酶在DNA分子中具有高度特異性,，能夠精確切割含有特定序列的DNA片段,。ApaLI內(nèi)切酶的活性受到環(huán)境因素（如pH值、離子濃度等）的影響,，因此在實(shí)驗(yàn)操作中需要注意調(diào)節(jié)適宜的反應(yīng)條件,。

ApaLI內(nèi)切酶的作用機(jī)制：

ApaLI內(nèi)切酶是一種雙鏈DNA內(nèi)切酶，通過識別特定的核苷酸序列,，在該序列的特定位置引發(fā)DNA鏈的切割反應(yīng),。ApaLI內(nèi)切酶在酶切位點(diǎn)周圍與DNA分子形成復(fù)合物，通過水解作用將DNA鏈切斷,，產(chǎn)生兩個(gè)具有粘性末端的DNA片段,。這些粘性末端可用于DNA片段的連接,、重組等進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)操作。

ApaLI內(nèi)切酶的應(yīng)用領(lǐng)域：

ApaLI內(nèi)切酶在分子生物學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用于DNA片段的切割,、重組,、連接等實(shí)驗(yàn)操作中。通過ApaLI內(nèi)切酶的作用,，可以在DNA分子中特異性地切割出含有目標(biāo)序列的片段，進(jìn)而進(jìn)行進(jìn)一步的DNA克隆,、測序,、PCR等實(shí)驗(yàn)操作。ApaLI內(nèi)切酶還常用于構(gòu)建重組質(zhì)粒,、定向基因突變等研究領(lǐng)域,，為研究人員提供了強(qiáng)大的工具和手段。

LightNing® 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒 DNA,、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing® 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性,，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切,。此外，百時(shí)美去磷酸化,、連接試劑在 CutOne® Buffer 中均具有 100% 活性,，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗(yàn),。

CutOne® Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料,，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。CutOne® Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,。

特性和用法

ApaLI 內(nèi)切酶可以快速內(nèi)切酶，可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)

建議反應(yīng)條件

1× CutOne®緩沖液,；

37℃溫育,；

參照“DNA 快速酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育20 min,。

甲基化敏感性

對于被 CpG 甲基化的 DNA,，剪切可能受阻，對于被 EcoKI 甲基化的 DNA,，剪切可能受阻,。

產(chǎn)品組成