IML-031 人臍靜脈內皮原代細胞-GFP(人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記(免疫熒光))
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- 公司名稱 南京賽泓瑞生物科技有限公司
- 品牌
- 型號 IML-031
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/12/28 9:37:24
- 訪問次數 356
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一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | 人臍靜脈內皮原代細胞-GFP(人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記)(免疫熒光) | |||
細胞別稱 | 人臍靜脈內皮原代細胞+GFP,;人臍靜脈內皮原代細胞-綠色熒光蛋白標記 | |||
種屬來源 | 人 | |||
組織來源 | 臍帶組織 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | |||
背景介紹 | 人臍靜脈內皮原代細胞細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因,,并穩(wěn)定表達GFP蛋白。 臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構,。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2,,代謝產物即代謝廢物和營養(yǎng)物質的交換,。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質從胎盤運送給胎兒,。 | |||
puro藥篩濃度 | 人臍靜脈內皮原代細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,,培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 | |||
細胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
支原體檢測 | 無 | |||
培養(yǎng)基 | 人臍靜脈內皮原代細胞專用培養(yǎng)基 | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳,;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞貨期 | 2周左右 | |||
運輸方式 | 復蘇發(fā)貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 | |||
供應限制 | 于科學研究,,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,,75%酒精消毒瓶壁,,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。 b,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,,棄去消化液,,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。 c,、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,,1000 rpm離心4 min,,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 d,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,,棄去上清液,,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,,加入約8 mL培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度,。 | ||
注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題,,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,,是正常現象,。 | 1.收貨時若發(fā)現干冰化完,,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,,若未融化可以將細胞按正常步驟保存,; 2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞,。 | ||
到貨須知 | 1.收到細胞后,,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象,,干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發(fā),細胞是否解凍,,若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系,。 2.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸的原因,,個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯系,,告知細胞的具體情況,,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關信息,,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題,,責任由客戶自行承擔。 | |||
備注:客戶在細胞培養(yǎng)過程中,,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,,我們隨時給予解答。 | ||||
三,、細胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,,液氮儲存 | |||
細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,,加 1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數,。 b,、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,,輕輕混勻,,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識,。 c,、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 | |||
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,,及時調整實驗方案 | |||
四,、售后服務 | ||||
重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā),; 2.收到細胞未開封,,如出現污染狀況,重發(fā),; 3.收到細胞3天內,,發(fā)現污染問題,經核實后,,重發(fā),; 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,,絕大多數細胞未存活,,經核實后,重發(fā),; 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,,出現污染,,經核實后,重發(fā),; 6.細胞活性問題,,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,,經核實后,,重發(fā); 7.視具體情況而定,。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,,不重發(fā); 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,,不重發(fā),; 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā),; 4.細胞狀態(tài)不好,,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā),; 5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的,,不重發(fā); 6.收到細胞發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,,不重發(fā),; 7.視具體情況而定。 |
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