副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus）,，為革蘭氏陰性桿菌,，呈弧狀、桿狀,、絲狀等多種形狀,，無芽孢。進(jìn)食含有該菌的食物可致食物中毒,，也稱嗜鹽菌食物中毒,。臨床上以急性起病、腹痛,、嘔吐,、腹瀉及水樣便為主要癥狀。副溶血性弧菌是一種海洋細(xì)菌,，主要來源于魚,、蝦,、蟹、貝類和海藻等海產(chǎn)品,。此菌對酸敏感,，在普通食醋中5分鐘即可殺死；對熱的抵抗力較弱,。

一,、簡介

副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP）是一種嗜鹽性細(xì)菌。副溶血性弧菌食物中毒,，是進(jìn)食含有該菌的食物所致,，主要來自海產(chǎn)品，如墨魚,、海魚,、海蝦、海蟹,、海蜇,，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜,、腌肉等,。本菌存活能力強(qiáng)，在抹布和砧板上能生存1個月以上,，在海水中可存活47天,。臨床上以急性起病、腹痛,、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀,。本病多在夏秋季發(fā)生于沿海地區(qū),，常造成集體發(fā)病。由于海鮮空運(yùn),，內(nèi)地城市病例也漸增多,。

此菌對酸敏感，在普通食醋中5分鐘即可殺死,；對熱的抵抗力也較弱,。副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在6~10月，海產(chǎn)品大量上市時,。中毒食品主要是海產(chǎn)品,，其次為咸菜、熟肉類,、禽肉,、禽蛋類,，約有半數(shù)中毒者為食用了腌制品后。中毒原因主要是烹調(diào)時未燒熟煮透或熟制品被污染,。

二,、生物學(xué)特征

副溶血性弧菌是一種革蘭氏陰性，多形態(tài)弧狀桿菌,。其菌體呈弧狀,、桿狀、或絲狀,，無芽孢且無莢膜,。大多數(shù)菌體在液體培養(yǎng)基中有單端鞭毛、能運(yùn)動,。此菌具有細(xì)胞色素氧化酶,，不分解蔗糖，但能在不產(chǎn)氣及不產(chǎn)生硫化氫的情況下分解葡萄糖而產(chǎn)酸等生化特性,。副溶血性弧菌為一嗜鹽性細(xì)菌,，必須在含鹽0.5%-8%的環(huán)境中方可生長，尤以含鹽量在2%-4%的情況下,。故其在無鹽的培養(yǎng)基上不能生長,，在含鹽濃度過高(10%以上)的培養(yǎng)基上也無法生長。副溶血性弧菌能夠在溫度為5-44℃范圍內(nèi)生長,，但以30-35℃為,，當(dāng)溫度低于40℃時則停止生長，適宜生長的pH為7.5-8.5,，以pH7.7為,，在pH低于6的酸性條件下則生長不佳。

三,、致病物質(zhì)

盡管副溶血性弧菌是引起食物中毒的重要病源菌,，但大多數(shù)的副溶血性弧菌沒有致病能力，只有少數(shù)高毒力的菌株才會致病,。

1,、神奈川現(xiàn)象

是廣泛用于檢驗副溶血性弧菌是否具有致病能力的一種體外實驗方法，它是由副溶血性弧菌產(chǎn)生的耐熱直接溶血毒素而引起的,。大多數(shù)具有致病能力的副溶血性弧菌包括幾乎所有來源于臨床和約1%來源于海水的菌株都可產(chǎn)生神奈川現(xiàn)象,，即呈神奈川陽性，而多數(shù)無毒力菌株則呈神奈川陰性,。因此耐熱直接溶血毒素被認(rèn)為是該菌的主要毒力因子,。

2、耐熱相關(guān)溶血毒素

盡管耐熱直接溶血毒素被為是副溶血性弧菌的主要毒力因子,，流行病學(xué)調(diào)查也表明副溶血性弧菌的致病力同其耐熱直接溶血毒素有高度的相關(guān)性,，菌株雖然不產(chǎn)生耐熱直接溶血毒素,，但卻能產(chǎn)生耐熱相關(guān)溶血毒素，也是毒力因子之,。

3,、尿素酶

尿素酶是某些副溶血性弧菌的毒力因子之一。有資料顯示,，耐熱直接溶血毒素的致病同尿素酶有密切關(guān)系,，尿素酶陽性菌株都具有耐熱直接溶血毒素基因，同時所有具耐熱直接溶血毒素基因的菌株也都具有能產(chǎn)生尿素酶的能力,。這些結(jié)果表明尿素酶基因與耐熱直接溶血毒素基因之間有一定的聯(lián)系,。

由此可見，耐熱直接溶血毒素,、耐熱相關(guān)溶血毒素,、尿素酶是副溶血性弧菌的三大毒力因子，其中耐熱直接溶血毒素是絕大多數(shù)副溶血性弧菌具有致病能力的毒力因子,，耐熱相關(guān)溶血毒素和尿素酶是少數(shù)臨床菌株的毒力因子,，耐熱直接溶血毒素的毒力與尿素酶的活性有關(guān)。

四,、檢驗

國標(biāo)(GB 4789.7－2013)中描述了對食品中副溶血性弧菌做定性/定量檢測的方法,。該方法采用3%氯化鈉堿性蛋白胨水增菌液進(jìn)行增菌后、接種于TCBS 或弧菌顯色培養(yǎng)基使包括副溶血性弧菌在內(nèi)的嗜鹽性弧菌得以分離,，可疑菌落經(jīng)氧化酶試驗,、3%氯化鈉三糖鐵斜面、革蘭氏染色和嗜鹽性實驗進(jìn)行初步判定,，最后可選擇生化,、鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行確定其是否為副溶血性弧菌。

（一）操作步驟

1,、分離培養(yǎng)：以無菌操作取樣品25g（mL）,，加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min 均質(zhì) 1min,，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2min，制備成1:10的樣品勻液,。于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h,。

對所有顯示生長的增菌液，用接種環(huán)在距離液面以下1cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液,，于TCBS平板或弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離,。一支試管劃線一塊平板。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h,。典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形,、半透明,、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸,，有類似口香糖的質(zhì)感,，直徑2mm～3mm。從培養(yǎng)箱取出TCBS平板后,，應(yīng)盡快（不超過1h）挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落,。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上的特征按照產(chǎn)品說明進(jìn)行判定。

2,、氧化酶試驗：挑選純培養(yǎng)的單個菌落進(jìn)行氧化酶試驗,，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。

3,、涂片鏡檢：將可疑菌落涂片,，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài),。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,，呈棒狀、弧狀,、卵圓狀等多形態(tài),，無芽胞，有鞭毛,。

4,、挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,，36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果,。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無氣泡,，斜面顏色不變或紅色加深,，有動力。

5,、嗜鹽性試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,，分別接種0%、6%,、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水,，36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察液體混濁情況,。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長,，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛，繼續(xù)進(jìn)行下列有關(guān)試驗,。

6,、 生化試驗：取純培養(yǎng)物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗培養(yǎng)基,、賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基、MR-VP培養(yǎng)基,，36℃±1℃培養(yǎng)24h～48h后觀察結(jié)果,；3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行ONPG試驗。

（三）樣品處理及注意事項

1,、樣品處理

采樣時應(yīng)注意準(zhǔn)備好滅菌用具及容器,，以無菌手續(xù)取有代表性的樣品，樣品必須盡快送檢,，不宜存放時間過長,，副溶血性弧菌在適宜溫度下繁殖較快，但不適于低溫生存,，在寒冷的情況下容易死亡,，防止待檢材料冷凍，以免影響檢驗結(jié)果,。

對采取的樣品有時因受存放條件的影響（如低溫冷凍或干燥時間過長等原因）,，使菌體處于受傷狀態(tài)，故需對此類可疑食品或可疑中毒材料進(jìn)行增菌培養(yǎng),，但應(yīng)注意為有利于細(xì)菌恢復(fù),，不宜選用抑制性較強(qiáng)的培養(yǎng)基，否則影響細(xì)菌生長,。

樣品經(jīng)增菌8~18h后,，轉(zhuǎn)種平板進(jìn)行分離，挑選可疑菌落,，接種于含有3％氯化鈉三糖鐵培養(yǎng)基,，此時挑選數(shù)目不應(yīng)少于5個,，尤其夏季海產(chǎn)食品混放,，相互污染嚴(yán)重，時有不同型別的大量細(xì)菌存在,，以防漏檢,。

2、注意事項

a,、傳染源傳染源為病人,，集體發(fā)病時往往僅少數(shù)病情嚴(yán)重者住院，而多數(shù)未住院者可能成為傳染源,，但由于病人僅在疾病初期排菌較多，其后排菌迅速減少,，故不至因病人散布病菌而造成廣泛流行,。

b,、傳播途徑本病經(jīng)食物傳播，主要的食物是海產(chǎn)品或鹽腌漬品,，常見者為蟹類,、烏賊、海蜇,、魚,、黃泥螺等，其次為蛋品,、肉類或蔬菜,。進(jìn)食肉類或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起,。

c,、地區(qū)分布特點(diǎn)：日本及我國沿海地區(qū)為副溶血性孤菌食物中毒發(fā)病率的高發(fā)區(qū)。據(jù)調(diào)查,，我國沿海水域,、海產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢出率較高，尤其是氣溫較高的夏秋季節(jié),。但近年來隨著海產(chǎn)食品的市場流通,，內(nèi)地也有副溶血性弧菌食物中毒的散在發(fā)生。

d,、季節(jié)性特點(diǎn)及易感性：7～9月常是副溶血性弧菌食物中毒的高發(fā)季節(jié),。男女老幼均可患病，但以青壯年為多,，病后免疫力不強(qiáng),，可重復(fù)感染。

f,、食物的種類：主要是海產(chǎn)品,，其中以墨魚、帶魚,、蝦,、蟹多見，如墨魚的帶菌率達(dá)93%,，其次為鹽漬食品,。食品中副溶血性弧菌的來源：人群帶菌者對各種食品的直接污染。沿海地區(qū)飲食從業(yè)人員,、健康人群及漁民副溶血性弧菌帶菌率為11.7%左右,，有腸道病史者帶菌率可達(dá)31.6～88.8%。間接污染，沿海地區(qū)炊具的副溶血性弧菌帶菌率為61.9%,，被副溶血性弧菌污染的食物,，在較高溫度下存放，食用錢加熱不或者生吃,，或熟制品受到帶菌者,、帶菌的生食品、帶菌容器及工具等的污染,。

五,、預(yù)防

三原則：防止污染、控制繁殖和殺滅病原菌,。為避免被其感染的風(fēng)險,，可以從以下3方面入手。

*原料方面：

溫度控制,，即冷藏處理,。海產(chǎn)品在捕撈后和即時加工階段迅速沖洗冷卻，并在運(yùn)輸,、貯藏和銷售等所有環(huán)節(jié)中保持4~10℃或更低溫度,，可有效控制副溶血性弧菌的繁殖。

*加工方面：

海產(chǎn)品要燒熟煮透,，56℃加熱5~10min或90℃加熱1min即可將其滅活,。要注意避免生、熟交叉污染,，使用不同的刀具,、砧板和用品用具分別處理生、熟食品,；生,、熟的食物要分別貯存；處理食物前洗凈雙手,。

*消費(fèi)方面：

避免進(jìn)食生或未經(jīng)煮透的食物,。切記食物要煮熟才可食用，進(jìn)食供生食的海產(chǎn)品時,，注意從衛(wèi)生良好,、信譽(yù)可靠的店鋪選購食物和有關(guān)材料。

此外,，應(yīng)加強(qiáng)通風(fēng)降溫

剩余食物要盡量冷卻

后保存在4℃以下的冰箱里

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