L-02人正常肝細(xì)胞 百歐博偉生物 細(xì)胞系

L-02人正常肝細(xì)胞 百歐博偉生物 細(xì)胞系

一,、細(xì)胞簡介

平臺編號：bio-106197

規(guī)格：1*10 6

拉丁屬名：L-02人正常肝細(xì)胞

細(xì)胞名稱：人正常肝細(xì)胞

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,，非藥用，非食用

二,、細(xì)胞描述

L-02細(xì)胞建系鑒定于1980年（葉秀珍等,，1980)。該細(xì)胞是一株正常肝細(xì)胞系,，具有典型的肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征,，可用于多種實驗研究。L-02樣品細(xì)胞跟EXPASY細(xì)胞數(shù)據(jù)庫收錄的細(xì)胞信息是匹配的,，不過這個細(xì)胞可能不被國外一些雜志認(rèn)可,。Problematic cell line: Contaminated. Shown to be a HeLa derivative (PubMed=26116706). Originally thought to originate from a normal fetal liver.

三、細(xì)胞特性

1）來源：人正常肝組織

2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

3）含量：>1x106

4）污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

四,、細(xì)胞的運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。                      

五,、細(xì)胞接收后的處理方法

1）收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4）貼壁細(xì)胞：在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代,。

六、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1,、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%,；雙抗,，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

2、細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞,，

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

傳代可參考以下方法：

1,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2,、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4,、將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

下面T25瓶為例；

1,、細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2,、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

3,、將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

七、注意事項

1,、收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

2,、收到細(xì)胞先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),，100*,，200*各一張）,，觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù),。

3,、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天,。

4,、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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